• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

イヌインターロイキン8遺伝子の発現とイヌ好中球およびリンパ球に対する機能の解析

Research Project

Project/Area Number 06760254
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Basic veterinary science/Basic zootechnical science
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

松本 安喜  東京大学, 農学部, 助手 (90251420)

Project Period (FY) 1994
Project Status Completed (Fiscal Year 1994)
Budget Amount *help
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1994: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywordsインターロイキン-8(IL-8) / 好中球 / IL-8活性 / cDNAクローニング / サイトカイン / 遊走試験 / PCR
Research Abstract

LPS刺激した健常犬の膝窩リンパ節由来単核球から抽出したmRNAよりcDNAを合成した。このcDNAを鋳型として,ヒトIL-8 cDNAの塩基配列をもとに作製したプライマーを用いてPCRを行ない,イヌインターロイキン-8(IL-8)cDNAに由来し,全蛋白コード領域を含むと思われる,約400bpのバンドが増幅された。このバンドから得られたクローンの塩基配列より,このクローンはヒト,ウサギ,ブタのIL-8 cDNAとそれぞれ76.5,80.2,87.0%の相同性を示す101アミノ酸をコードすることがわかった。さらに,得られたクローンをpcDL-SRa296発現ベクターに組み込み,MDCK細胞およびCos7細胞に導入したところ,その培養上清には好中球走化性を誘導する活性がBoyden chamber変法を用いたchemotaxis assayにおいて認められ,本クローンが機能的タンパクをコードすることが示された。さらに,イヌIL-8 cDNAをpMAL-cRI大腸菌発現ベクターにサブクローニングし,大腸菌DH5a株に導入したところ,IPTGによりマルトース結合蛋白(MBP)とイヌIL-8との融合蛋白が産生され,本蛋白はマルトースカラムを用いたアフィニティクロマトグラフィーにより精製された。本融合蛋白をマウスに免疫したところ,抗イヌIL-8抗体価の上昇がグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)-イヌIL-8融合蛋白を抗原としたELISAにより認められた。現在,MBP-イヌIL-8融合蛋白で免疫したマウスを用いて単クローン抗体を作成中である。

Report

(1 results)
  • 1994 Annual Research Report
  • Research Products

    (1 results)

All Other

All Publications (1 results)

  • [Publications] 松本安喜,他: "Molecular cloning and expression of canine interleukin 8 cDNA" CYTOKINE. 6. 455-461 (1994)

    • Related Report
      1994 Annual Research Report

URL: 

Published: 1994-04-01   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi