| Project/Area Number |
06780502
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Functional biochemistry
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岡本 明弘 大阪大学, 理学部, 助手 (40243159)
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| Project Period (FY) |
1994
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1994)
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| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1994: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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| Keywords | オリゴマー蛋白質 / 耐熱化機構 / 触媒反応機構 / 基質認識機構 / 蛋白質工学 / 量産化 / X線結晶解析 / アミノ基転移酵素 |
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| Research Abstract |
オリゴマー蛋白質として、2量体構造をとる アスパラギン酸アミノ基転移酵素(AspAT)を用い、以下の手順でオリゴマー蛋白質の耐熱化機構に関する解析を行った。
(1)高度好熱菌 Thermus thermophilus HB8のASPAT 遺伝子を、PCR法を用いてクローニングした。
(2)塩基配列決定を行い、アミノ酸配列を推定した。その結果を常温菌の酵素と比較すると、蛋白質の会合面に存在するアミノ酸残基がよく保存されていた。
(3)酵素を量産化するプラスミドを作製した後、酵素を精製した。
(4)円二色性スペクトルによる分光学的測定の結果、約90℃まで耐熱性であった。
(5)酵素活性は、常温菌・好熱菌の酵素いずれもほとんど同じであった。
(6)X線結晶解析で、立体構造を解明するために、酵素の結晶化を行った。
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