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クロマチンの構造変化による転写制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 06780565
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Molecular biology
Research InstitutionTokyo University of Pharmacy and Life Science

Principal Investigator

清水 光弘  東京薬科大学, 薬学部, 助手 (80231364)

Project Period (FY) 1994
Project Status Completed (Fiscal Year 1994)
Budget Amount *help
¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 1994: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywords転写制御 / クロマチン / ヌクレオソーム / Rmel蛋白質 / Zn-finger / S.Cerevisiae / non-B型DNA構造
Research Abstract

1.酵母ゲノム及びミニ染色体におけるZn-finger蛋白質Rmelによる転写抑制機構
Zn-fingerを持つRmel(Repressor of Meiosis)は,S.cerevisiaeの減数分裂活性化因子であるIME1(Inducer of Meiosis)の転写を抑制することによって減数分裂開始を阻害している.Rmelによる転写抑制機構を明らかにするために,UV-photo,dimethyl sulfate(DMS)in vivo footprint法,Northern法などによってIME1,RME1の変異株を解析した結果,以下のことが明らかになった.
1) RmelはIME1上流-2030と-1950の2箇所に結合し,2つの部位の塩基配列には,コンセンサス(CCTCAA(G)AAG)がある.2)RmelのZn-fingerがin vivoでDNA結合に関与しており,転写抑制の機能に必須である.3)2つの結合部位を破壊すると,RmelはIME1の転写を抑制できなくなり,Rmel欠損株と同じように胞子形成が起こる.4)RGR1とSIN4の遺伝子を破壊しても,Rmelの結合には変化はないが,転写のderepressionが起こる.5)CYC1プロモーターにおけるRmelの転写抑制機構として,転写活性化因子Hap1,Hap2/3/4の結合が阻害されることがin vivoで実証された.以上の知見から,Rmelの転写抑制機構におけるクロマチン構造の関与が示唆された.
2.DNAの高次構造とクロマチンの構築
酵母α2 repressorによってポジショニングしたヌクレオソームの中央またはリンカー部位に分子内三重鎖,cruciform,左巻Z-DNAの配列をクローンした.このようなnon-B型DNA構造がヌクレオソームを破壊して,ヌクレアーゼ感受性領域を形成することが示唆された.

Report

(1 results)
  • 1994 Annual Research Report

URL: 

Published: 1994-04-01   Modified: 2016-04-21  

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