マウス初期発生におけるアポトーシスの役割およびそのサイトカインによる制御

• Project/Area Number: 06780611
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Developmental biology
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 門松 健治 名古屋大学, 医学部, 講師 (80204519)
• Project Period (FY): 1994
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1994)
• Budget Amount: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 1994: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: アポトーシス / ミッドカイン / リボザイム / 遺伝子ターゲッティング

Research Abstract

EC細胞の1クローン、HM-1細胞を用い、レチノイン酸を加えることで細胞分化を誘導した。ターゲットのサイトカインの1つ、ミッドカイン(MK)は、この細胞分化時に一過性の強い発現誘導が見られる。この際のアポトーシスをDNA ladderを指標にして追った。アポトーシスはレチノイン酸添加後24〜48時間で観察できるが、分化誘導前の幹細胞の状態でも程度は低いがアポトーシスはおこっており、MKあるいは他のサイトカインの発現とアポトーシスの出現を直接関連づけるのは困難と見られた。そこで、内在性のサイトカイン(この場合はMK)の発現をシャットアウトすることでMKとアポトーシスの直接の連関を調べるシステムをつくることを考えた。そして次の2つの実験に集中した。1つは、MK特異的なハンマーヘッド型リボザイムの発現ベクターの作製である。マウス、ヒトMKに特異的なリボザイムをデザインし、in vitroでターゲットのMKRNAを切断することを確かめ、このリボザイムの発現ベクターの細胞への導入を行なった。この成果の一部は、第8回International Conference of the International Society of Differentiation(広島)で発表した。現在、リボザイム導入を行なった細胞のクローン化及び、その解析を行なっている。2つ目は、MKのダブルノックアウト細胞の樹立である。マウスMKのゲノムとネオマイシン耐性遺伝子、ジフテリアトキシン遺伝子の組み合わせで、ターゲット用のベクターを作製することができた。現在1回目のノックアウト用のES細胞への遺伝子導入を行なおうとしている。
マウス初期発生のアポトーシス、内でもアポトーシスとMKの連関を探る分野で、進歩を得た。今後は、リボザイム、ノックアウトの2つの手法を中心にさらにこの研究を発展させたい。