| Project/Area Number |
07269215
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
山田 道之 横浜市立大学, 理学部, 教授 (10076995)
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| Project Period (FY) |
1995
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1995)
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| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 1995: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
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| Keywords | 顆粒球 / 白血病細胞 / DNA結合タンパク質 / 転写因子 |
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| Research Abstract |
正常白血球や骨髄性白血病細胞の増殖分化に転写の調節機構が密接に関連している。顆粒球の特異的タンパク質であるミエロペルオキシダーゼ(MPO)の遺伝子は、顆粒球の分化の特定の時期に発現する。この遺伝子の発現にイントロン7と9のシス-エレメントが関与すると考えている。本研究の目的は、これらのシス-エレメントに結合するDNA結合タンパク質を分子生物学的に明らかにすることである。
上記2つのシス-エレメントFEREとJKT41を合成し、これらをプローブとして用いて、ゲルシフトアッセイをおこない、DNA結合タンパク質を解析した。HL-60細胞のこれらのタンパク質は分化誘導剤のレチノイン酸やTPA処理により少し減少した。だが、MPO発現のないK562細胞でも、検出された。
つぎに、これらのDNA結合タンパク質cDNAクローニングに着手した。HL-60cDNAやK562cDNA発現ライブラリを上記プローブを用いて、サウスウエスタン法により検索した。2つのクローンを得て、KJ1とKJ2と命名した。cDNAはそれぞれ約250と900塩基対であった。cDNAの塩基配列のホモロジ検索をしたところ、KJ1は新規クローンであり、KJ2はDNA複製因子Cの一部であた。KJ1は部分アミノ酸配列の特徴から、DNAにもRNAにも結合する転写因子だろうと推察した。今後、完全鎖長cDNAをクローニングし、構造を解析、タンパク質機能を解析しなければならない。
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