| Project/Area Number |
07272216
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
永田 恭介 東京工業大学, 生命理工学部, 助教授 (40180492)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菊池 韶彦 三菱化学, 生命科学研究所, 主任研究員 (40283428)
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| Project Period (FY) |
1995
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1995)
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| Budget Amount *help |
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 1995: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
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| Keywords | アデノウイルス / 発がん / 転写 / 複製 / クロマチン構造 / がん遺伝子 / 無細胞系 / 染色体転座 |
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| Research Abstract |
従来のアデノウイルス(Ad)遺伝子の複製・転写研究は他の遺伝子についての研究と同様に裸のDNAを鋳型として用いて行なわれてきた。しかし、AdDNAは粒子中ではウイルスコアタンパク質と複合体(Adコア複合体)を形成してクロマチン様構造をとっており、感染細胞内においても初期遺伝子の転写や遺伝子複製の真の鋳型はこのコア複合体と考えられている。そこで、このコア複合体を調製し、鋳型として用いて、新たに無細胞複製系を確立した。その結果、コア複合体状の遺伝子の複製には裸の遺伝子の複製に必須であった因子に加えて新たに同定した宿主細胞の因子、TAF-I(Template Acivating Factor-I)が必要であった。TAF-Iの部分アミノ酸配列を決定し、この情報をもとにcDNAをクローニングした。塩基配列を決定したところ、TAF-Iはある種の急性骨髄性白血病に付随した染色体転座領域に存在する遺伝子、setの産物であることが示された。クローン化されたcDNAより作製した野生型および各種欠損型組換え体TAF-Iを用いた解析から、複製系におけるTAF-I活性にはC末側の長い酸性アミノ酸領域が必須であることが明かとなった。また、TAF-Iはコア複合体からのウイルス初期遺伝子の転写を活性化した。組換え体TAF-Iを用いて作製した抗体を用い、TAF-Iが進化的に保存されたタンパク質であることを明かにした。
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