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HLA-A26拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子の同定

Research Project

Project/Area Number 07274269
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Research InstitutionKurume University

Principal Investigator

伊藤 恭悟  久留米大学, 医学部, 教授 (50125499)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 今井 康久  久留米大学, 医学部, 助手 (90268847)
中尾 真修  久留米大学, 医学部, 助手 (40258447)
Project Period (FY) 1995
Project Status Completed (Fiscal Year 1995)
Budget Amount *help
¥4,000,000 (Direct Cost: ¥4,000,000)
Fiscal Year 1995: ¥4,000,000 (Direct Cost: ¥4,000,000)
Keywords癌退縮抗原 / 遺伝子クローニング / 扁平上皮癌 / HLA-A2601拘束性 / キラーT細胞 / 抗原ペプチド
Research Abstract

HLA-A2601拘束性扁平上皮癌特異的癌退縮抗原遺伝子と考えられるcDNA (6A1と仮称)を以下の方法を用いてクローニングした。
1)一次スクリーニング: HLA-A2601 gene及びcDNAライブラリーのVA13 cellsへのdouble transfection及びCTLとIFNγELISAによるスクリーニング。リポフェクチン法にてHLA-A2601 geneとKE4癌細胞株cDNAライブラリーをVA13 cellにdouble transfectした。HLA-A2601拘束性CTL (10000 cells/well/200μl)を加えてさらに18時間培養し、上清中のIFNγ値をELISAにて測定した。
2)二次スクリーニング:一次スクリーニングにて陽性であった4 wellsからのcDNAライブラリーをさらに二次スクリーニングに提供し、合計800個(4×200)のコロニーよりプラスミドDNAを作成しHLA-A2601とともにVA13 cellsにdouble transfectionし1)同様の操作にて約20個の陽性クローンを得た。
3)三次スクリーニング:二次スクリーニングにて陽性であった20個のクローンを再度検定し2個のクローン(6A1と14G1)をえた。これらの遺伝子をSP6及びT7プライマーを用いて搬入遺伝子の塩基配列を自動塩基配列解析装置(pharmacia社)を用いて決定した。
4) 6A1は1.2kb, 14G1は3.2kbのこれまでに報告されてない塩基配列であった。両クローンを再度検定し、活性のより明確な6A1を先発して研究を推進させつつある。即ちdeletion mutantを作成しHLA-A2601結合性癌抗原ペプチド及びNortherh Blot法にて組織分布を実施中である。以上要約すると6A1遺伝子は約1.2kbより成り膜貫通部分と思われる構造を有し、Gene Bankでの検索では新規のものと考えられる。

Report

(1 results)
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All Publications (8 results)

  • [Publications] Shichijo, S.: "Detection of MAGE-4 protein on lung cancers." Int. J. Cancer. 64. 158-165 (1995)

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  • [Publications] Shichijo, S.: "Establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measuring cellular MAGE-4 protein on human cancers" J. Immunol. Meth.186. 137-149 (1995)

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  • [Publications] Yamada, A.: "Expression of MAGE genes in ovarian tumors." Int. J. Cancer. 64. 388-393 (1995)

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  • [Publications] Takahashi, K.: "Identification of MAGE-1 and-4 proteins in spermatogonia and primary spermatocytes of testis." Cancer Res.55. 3478-3482 (1995)

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  • [Publications] Nakao, M.: "HLA A2601-restricted cytotoxic T lymphocytes recognizing a peptide antigen expressed on squamous cell carcinoma." Cancer Res.55. 4248-4252 (1995)

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  • [Publications] Sugita, S.: "Melanocyte Lysis by CTL Recognizing the MART-1 Melanoma Antigen in HLA-A2 Patients with Vogt-Koyanagi-Harada (VKH) Disease." Int. Immunol.8(in press). (1996)

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  • [Publications] Itoh, K.: "Biology of Renal Cell Carcinoma" Ronald M. Bukowski, James H. Finke, Eric A. Klein, Springer-Verlag, 1995

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  • [Publications] Itoh, K.: "International Reviews of Immunology." (eds) Kumagai, K., Kasakura, S., Springer-Verlag (in press), (1996)

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Published: 1995-04-01   Modified: 2016-04-21  

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