| Project/Area Number |
07283202
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
山下 正兼 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (30202378)
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| Project Period (FY) |
1995
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1995)
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| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 1995: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
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| Keywords | 卵成熟 / 減数分裂 / 魚類 / 両生類 / mRNA / MPF / cdc2 / サイクリンB |
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| Research Abstract |
1.卵成熟促進因子(MPE)の形成・活性化機構
キンギョ卵成熟誘起に重要な意味を持つサイクリンBの翻訳開始機構を探るため、キンギョ卵成熟過程におけるサイクリンBmRNAのポリA鎖の変化を調べた。ポリA鎖は卵核胞崩壊後に伸長することが示され、これはサイクリンBmRNAの翻訳開始より、安定化に関わることが示唆された。サイクリンBmRNAの翻訳開始に関わると予想されるサイクリンB特異的翻訳阻害因子を同定するため、サイクリンBmRNAに結合する蛋白質の検索を行った。その結果、3種のタンパク質が検出され、これらタンパク質をコードするcDNAのクローニングを計画している。
アカガエル卵成熟過程におけるMPFの形成・活性化機構を調べるため、アカガエルサイクリンB1、B2のcDNA(全長の約2/3)をRT/PCRで得、その産物に対する抗体を作製した。これを用い、卵成熟過程におけるサイクリンB1、B2の挙動を調べ、キンギョと同様、アカガエル未成熟卵にはcdc2・サイクリンB複合体はなく、ホルモン刺激後に形成されることがわかった。しかし、キンギョと異なり、ツメガエルと同様、その活性化にはcdc25が必要であることが示された。これらのことは、アカガエルはキンギョとツメガエルの中間的なMPF形成・活性化機構を採用していることを示す。
2.MPFの作用、特に卵成熟に果たす役割
大腸菌で作製されたキンギョサイクリンBタンパク質をゼブラィシュ未成熟卵に注射すると、卵核胞崩壊が起こったが、染色体凝縮は見られなかった。このことは、cdc2・サイクリンB複合体は卵核胞崩壊には関与するが、染色体凝縮には関与しないことを示唆する。
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