| Project/Area Number |
07457186
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
Pediatrics
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
小板橋 靖 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40081715)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
生駒 雅昭 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (10139686)
茆原 博志 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (90139642)
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| Project Period (FY) |
1995 – 1996
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1996)
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| Budget Amount *help |
¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1996: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | 特発性ネフローゼ / ヌードマウス / 末梢リンパ球移植 / 末梢血幹細胞移植 |
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| Research Abstract |
小児特発性ネフローゼ症候群(特ネ症)の発症機序は現在なお不明な点が多く、発症メカニズム解明と治療法開発のため、その動物モデルの作製が望まれている。私共は、ヒト特ネ症の動物モデル作製のため、ヌードマウスにヒトネ症患者の末梢リンパ球および末梢血幹細胞をヌードマウスに移植するにあたり、その移植法と生着に必要な条件を検討した。現在のところ、以下の結果が得られた。
(1)リンパ球の注入法の検討に関しては、尾静脈からの直接注入、腎被膜下腔への注入、腹腔内への注入と色々試みたが、結論としては、容易性と確実性から腹腔内注入が適切であると判断された。
(2)特発性ネ症患者から10ml採血し、フィコールコンレイ法でリンパ球を採取し、凍結保存し実験に合わせて、その都度凍結融解し、生存しているリンパ球のみ選別し、3〜6×10^5に数合わせし、腹腔内に注入した。
(3)リンパ球の注入されたヌードマウスは平均3カ月生存し、その後順次、恐らくはGVHDにて死亡する事が推測された。
(4)リンパ球注入されたヌードマウスは4〜8週の間に心臓穿刺にて採血され、ヒトリンパ球が生存している事をヒトCD3(Pan T cell)抗体で染色し確認した。
(5)特発性ネフローゼの本態であるリンパ球由来の血管透過性因子(VPF)の検討は、心臓穿刺にて得られた血漿のの2倍、5倍、10倍、100倍の稀釈系列を作り、モルモットの皮内に0.05ml注入し、10〜20分後に1%エバンスブルー溶液0.5mlを足背動脈より動注し、皮内にて色素脱出し青く染まった皮膚の面積から、VPFの量を推測した。
以上特ネ症のリンパ球がヌードマウスに移植できる事は確認されたが、ヌードマウスの血液中で移植リンパ球が活性化され、VPFが増加しているのか否かは検討中、さらにVPFを増加させるにはどの様な条件が必要か検討中である。
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