DNA結合能を有する微小管モーター蛋白質(Kid)の細胞分裂及び増殖における機能

• Project/Area Number: 07458188
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Cell biology
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 山本 雅 東京大学, 医科学研究所, 教授 (40134621)
• Project Period (FY): 1995 – 1997
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1997)
• Budget Amount: ¥7,400,000 (Direct Cost: ¥7,400,000); Fiscal Year 1997: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000); Fiscal Year 1996: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000); Fiscal Year 1995: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
• Keywords: 細胞分裂 / 紡錘体形成 / 染色体分配 / 細胞周期依存的リン酸化 / セントロメア / モーター蛋白質 / キネシン / Kid / α-サテライトDNA / ユビキチネーション / 核膜崩壊 / アルフォイドDNA / EBウイルス

Research Abstract

KidはDNA結合能を持つキネシン様モーター蛋白質で細胞分裂期(細胞周期M期)で重要な役割を果たしていることが示唆されている。今年度は、昨年度までに見出したKid会合蛋白質の解析と、Kidのリン酸化による機能制御に関する解析を主として行った。
1. yeast two-hybrid法により、Kid会合蛋白質の候補として見出したFAFl,UBC9各蛋白質の全長cDNAを得た。このうちFAF1とUBC9cDNAについてはFLAGTagをつけて発現ベクターpMEI8Sに組み込んだ。これをKidと共に293T細胞に共発現させ、その細胞抽出液を用いた免疫共沈実験を行った。その結果、293T細胞内でもKidはFAF1やUBC9と会合しうることが分かった。
2. HeLa細胞をS期で同調させ、細胞周期依存的Kid蛋白質のリン酸化を調べた。その結果、M期でKid蛋白質がよりリン酸化されていることが示唆された。Kid蛋白質はcdc2キナーゼによりリン酸化されうる配列TPKRERを有しており、事実カエル卵から精製したcyclinB/cdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化された。又、M期の進行に重要であることが報告されているPLKキナーゼについても、そのcDNAにmyc Tagをつけた発現プラズミドを導入した細胞の抽出液を用い、その中の抗myc抗体による沈降物がGST Kidをin vitroでリン酸化することを示した。次いでcdc2キナーゼによりリン酸化を受けると予測された配列(TPKRER)の、リン酸化型を特異的に認識する抗体を作成した。
3. 米国UCSFのグループとの共同研究により、カエル卵抽出液中に抗Kid抗体と反応する約61kDa蛋白質の存在が確認された。おそらくこれは、カエルKid蛋白質と考えられ、cDNAクローニングを試みている。

Research Products

• [Publications] Noriko Tokai: "Kid,a novel kinesin-like DNA binding protein,is colocalized with the chromosomes during mitosis." EMBO J.15. 457-467 (1996)
• [Publications] Masahiko Yasunaga: "Involvement of Fyn tyrosine kinase in progression of cytokinesis of B lymphocyte progenitor." J.Cell Biol.132. 91-99 (1996)
• [Publications] Dusko Ilic: "Imairment of mobiliy in endodermal cells by FAK deficiency." Exp.Cell Res.222. 298-303 (1996)
• [Publications] Dusko Ilic: "Focal adhesion kinase at the crossroads of signal transduction." J.Cell Sci.(in press).
• [Publications] Tokai,N.: "Kid,a novel kinesin-like DNA binding protein,is colocalized with the chromoscomes during mitosis." EMBOJ.(in press). (1996)
• [Publications] Yasunaga,M.: "Involvement of Fyn Tyrosine Kinase in Progression of Cytokinesis of B Lymphocyle Progenitor." J.Cell Biol.(in press). (1996)
• [Publications] Matsuda,S.: "Tob,a novel protein that interacts with p185^<erbB2>,is associated with anti-proliferative activity." Oncogene. (in press). (1996)
• [Publications] Iic,D.: "Reduced cell motillty and enhanced focal adbesion contact formation in cells from FAK-deficlent mice." Nature. 377. 539-544 (1995)
• [Publications] Yamanoto,T.: "Superfamilies of Protooncogenes:Homology Cloning and Characterization of Related Members." Methods in Enzymology(eds.Vogt and Verma)Academic Press., 15 (1995)
• [Publications] Yamamoto,T.: "Molecular biology of cancer:Oncogenes and tumor suppressor genes." Molecular Biology in Clinical Oncology and Hematology, 15 (1995)