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腎毒性予測法の開発

Research Project

Project/Area Number 07557317
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Section展開研究
Research Field 応用薬理学・医療系薬学
Research InstitutionKyorin University

Principal Investigator

遠藤 仁  杏林大学, 医学部, 教授 (20101115)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 細山田 真  杏林大学, 医学部, 助手 (00291659)
関根 孝司  杏林大学, 医学部, 助手 (50255402)
武田 理夫  杏林大学, 医学部, 講師 (40255401)
車 碩鎬  杏林大学, 医学部, 助手 (50276200)
Project Period (FY) 1995 – 1997
Project Status Completed (Fiscal Year 1997)
Budget Amount *help
¥5,800,000 (Direct Cost: ¥5,800,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Fiscal Year 1996: ¥4,200,000 (Direct Cost: ¥4,200,000)
Keywords近位尿細管直部 / 有機アニオン / ジカルボン酸 / トランスポーター / ジカルボン酸トランスポーター / 有機アニオントランスポーター / プロスタグランジン / β-ラクタム抗生物質 / 腎内輸送 / 腎内蓄積 / 不死化細胞 / 近位尿細管中間部 / 近位尿細管終末部 / 髄質外層集合管 / シスプラチン / アポトーシス / 陰イオン有機酸輸送 / デキサメサゾン
Research Abstract

平成8年度において、分子クローニングに成功した有機アニオントランスポーター(OAT1)のDNAシークエンス、組織分布、機能解析を実施した。
(1)OAT1の化学構造
OAT1はアミノ酸551個より成り、そのhydropathy plotより膜12回貫通型のタンパクであり、N末とC末は共に細胞質内に存在する。第一と第二の膜貫通の外側に位置する大きなループには4個のN-糖鎖結合部位が予測される。又第6と第7の膜貫通に連なる細胞質内ループにはC-キナーゼによるリン酸化部位の存在が予測された。
(2)組織分布
ノザンブロットによりOAT1のmRNAは腎に強く、脳に弱く発現が認められ、他の臓器にはその発現は認められなかった。腎内では皮質に高く分布していた。C末端のペプチドに対する抗体による免疫組織化学染色では近位尿細管の基底側膜にOAT1の局在が認められた。
(3)機能解析
OAT1のcRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入した発現系による機能解析では、^<14>C標識パラアミノ馬尿酸(PAH)の取り込みはジカルボン酸との交換輸送であった。Km値は14μMで、輸送基質は内因性物質としてはプロスタグランジン類、cAMP、cGMP、尿酸、ジカルボン酸等、外来性物質としては非ステロイド系抗炎症薬、β-ラクタム系抗生物質、利尿薬、抗腫瘍薬、抗痙攣薬、変換酵素阻害薬、マイコトキシン類などの多岐に及んでいた。
以上のOAT1の新しい多選択性輸送機能から類推すると、OAT1は従来より存在が予測されていた腎の有機陰イオン輪送系の主要なトランスポーターである事が判明した。この遺伝子を強制発現させた培養細胞を用いて、各種薬物の腎毒性のスクリーニングが可能と思われる。

Report

(3 results)
  • 1997 Annual Research Report
  • 1996 Annual Research Report
  • 1995 Annual Research Report
  • Research Products

    (23 results)

All Other

All Publications (23 results)

  • [Publications] Kim,H.S.,Cha,S.K.,Abraham,D.G.,Cooper,A.J.L&Endou,H.: "Intranephron distribution of cysteine S-conjugate β-lyase activity and its implication for hexachloro-1,3-butadiene-induced nephrotoxicity on rats." Arch.Toxicol.71. 131-141 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Nosaka,K.,Takahashi,T.,Nishi,T.,Imaki.,H.,Suzuki,T.,Suzuki,K.,Kurokawa,K.&Endou,H.: "An adenosine deaminase inhibitor prevents puromycin aminonucleoside Nephrotoxicity" Free Radical Biol.Med.22(4). 597-605 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Osaki,T.,Shirato,I.&Endou,H.: "Staurosporine-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is modulated by BCL-2 expression level" Biochem.Mol.Biol.Int.42(4). 649-656 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Sekine,T.,Wananabe,N.,Hosoyamada,M.,Kanai,Y.&Endou,H.: "Expression cloning and characterization of a novel multispecific organic anion transporter." J.Biol.Chem.272(30). 18526-18529 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Shirato,I.,Osaki,T.&Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is mediated by interleukin-1β converting enzyme (ICE) family of proteases but inhibited by overexpression." Arch.Toxicol.71. 612-621 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Utsunomiya-Tate,N.,Endou,H.,&Kanai,Y.: "Tissue specific variants of glutamate transporter GLT-1." FEBS Let.416. 312-316 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Endou,H.,Kanai,Y.,Utsunomiya-Tate,N.&Hosoyamada,M.: "Contrib.Nephrol."Nutritional and acid-base aspects of amino acid metabolism"" Karger, 172 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] 長沢俊彦、河邉香月、伊藤克巳、浅野 泰、遠藤 仁: "Annual Review 腎臓 1998" 中外医学社, 239 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Takeda,M.,Fukuoka,K.and Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis in mouse proximal tubular cell line." Contr.Nephrol.118. 24-28 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Utsunomiya-Tate,N.,Endou,H.and Kanai,Y.: "Cloning and functional characterization of a system ASC-like Na+-dependent neutral amino acid transporter." J.Biol.Chem.271(25). 14883-14890 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Takeda,M.,Kawamura,T.,Kobayashi,M.& Endou.H.: "ATP-induced calium moblization in glomerular mesangial cells is mediated by P2u purinoceptor." Biochem.Mol.Biol.Int.39(6). 1193-1200 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Takeda,M.and Endou.H.: "Molecular aspects of ATP metabolism and ATP receptors in nephron segments." J.Nephrol.9(5). 232-240 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] 武田理夫、遠藤仁: "薬物性腎障害-in-vitro系によるアプローチを中心に" 日薬理誌. 107. 1-8 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] 遠藤仁: "腎機能の老化" 必尿器外科. 9(1). 1-5 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] 長沢俊彦、河邉香月、伊藤克己、浅野泰、遠藤仁: "Annual Review 腎臓" 中外医学社, 247 (1997)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] S. H. Cha, K. Y. Jung H. Endou: "Effect of P_<2Y>-purinoceptor stimulation on renal gluconeogenesis in rats." Biochem. Ciophys. Res. Commun.211(2). 454-461 (1995)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] K. H. Lee, Y. J. Cho, S. B. Lee, K. C. Cho, S. H. Cha, H. Endou: "Evidence suggesting a role for phospholipase C isozyme, PLC-δ_1 in corticomedullary osmotic gradients in rat kidneys." Biochem. Mol. Biol. Int.37(1). 25-32 (1995)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] M. Takeda, M. Hosoyamada, I. Shirato, M. Obinata, H. Endou: "Establishment of vasopressin-responsive early proximal tubular cell lines derived from transgenic mice harboring temperature-sensitive simian virus 40 large T-antigen gene." Biochem. Mol. Biol. Int.37(3). 507-515 (1995)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] M. Takeda, K. Y. Jung. T. Sekine, H. Endou, H.: "Guanidinoacetic acid (GAA) synthesis in rat tubular suspension as a system for evaluating gentamicin (GM) nephrotoxicity." Toxicol. Let.81. 85-89 (1995)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] K. Nosaka, T. Takahashi, A. Miyanoshita, T. Nishi, K. Suzuki, K. Kurokawa, H. Endou: "Effect of adenosine of phorbol myristate acetate induced-reactive aoxygen metabolite production in cultured mesangial cells." Free Radical Biol. Med.20(1). 151-155 (1996)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] M. Hosoyamada, M. Obinata M. Suzuki, H. Endou: "Cisplatin-induced toxicity in immortalized renal cell lines established from transgenic mice harmoring temparature sensitive SV40 large T-antigen gene." Arch. Toxicol.70. 284-292 (1996)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] H. Endou, M. Hosoyamada: "Diuretics (Greger, R. F. et al. eds.)" Springer-Verlag, 517 (1996)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report
  • [Publications] 長沢俊彦、河邉香月 伊藤克己、浅野 泰、遠藤 仁: "Annual Review 腎臓" 中外医学社, 295 (1996)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report

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Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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