| Project/Area Number |
07557341
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Section | 試験 |
|---|
| Research Field |
Neurology
|
|---|
| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
|---|
Principal Investigator |
横田 隆徳 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (90231688)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
道川 誠 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (40270912)
和田 義明 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (50182986)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1995 – 1996
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1996)
|
| Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1996: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
|
|---|
| Keywords | CAGリピート / アンドロゲンレセプター / pRc / CMVベクター / PC12 / neural plasticity / エレクトロポレーション / 運動ニューロン単位 / 2段階標的遺伝子組換法 / mutationベクター / taggingベクター / pCMV発現ベクター / サブトラクションcDNAライブラリー |
|---|
| Research Abstract |
本研究では、CAGリピートの増加したアンドロゲンレセプター(androgen receptor,AR)の神経細胞におけるneural plasticityへの影響を解析するとともに、CAGリピートの増加により発現異常をきたしたAR標的分子を検索し、CAGリピートの増加に関わる神経細胞変性機序の解明を目的としている。
神経細胞分化の研究に用いられてきたPC12細胞は、ARを発現していないため遺伝子導入したARの細胞への影響を評価する上で適している。今回、PC12に正常CAGリピート数のAR全長cDNA、CAGリピートが増加したAR全長cDNAを導入した。ARによる効果が、ホルモン結合、DNA結合部位を介したものかどうかを検討するために、ホルモン及びDNA結合部位を欠く正常及びCAGリピートの増加したエクソン1のみの導入も併せて行った。
正常及びCAGリピートの増加したヒトARのcDNA全長とヒトARのエクソン1領域のクローニングを行った。それぞれをpRc/CMVベクターにサブクローニングし、自動シークエンサーにてシークエンスを確認した。
遺伝子導入は、エレクトロポレーションにて行い、ネオマイシン耐性株をクローン化する。AR発現量は、ノーザンブロット解析にて検討しARの高い発現量を示すクローンを選別した。全長cDNAを導入したクローンは、アンドロゲンバインデング活性を検討し、アンドロゲンバインデング活性のあるクローンを実験に使用する。
ARcDNA及びエクソン1を導入したPC12に神経成長因子を添加し、分化誘導させる。PC12のneural plasticityの評価は、細胞当たり平均神経突起長、神経突起数、神経突起面積などを視標として検討する。AR遺伝子のCAGリピート数の増加による変化を解析し、CAGリピート増加に伴う神経細胞変性機序について検討中である。
|
