高レムナント血症が介在するアポトーシスと動脈硬化発現機構の研究

Research Project

Project/Area Number	07671156
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	内分泌・代謝学
Research Institution	Jikei University School of Medicine
Principal Investigator	多田紀夫東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教授 (60138774)
Project Period (FY)	1995
Project Status	Completed (Fiscal Year 1995)
Budget Amount *help	¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000) Fiscal Year 1995: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywords	リポ蛋白 / レムナント粒子 / アフィニティカラム / アポトーシス
Research Abstract	アポ蛋白Eのアイソフォームにて確認したIII型高脂血症患者血清から超遠心法にてVLDL(d>1.006g/ml)を採取。この分画を20mlのモノクローナル抗ヒトアポAl・アポB-100抗体イムノアフィニティカラムに添加し、非結合分画としてのレムナント粒子を採取した。同レムナント粒子はカラム結合分画に比して、アポEに富み、コレステロール/蛋白比は約2倍であった。また、培養マウス腹腔マクロファージへのコレステロールオリエ-トの取り込みを有意に増加した。培養動脈壁細胞としてHUVECを用い、同レムナント粒子と共に培養した。培養液中のレムナント粒子の濃度は(0,1,2,4mg/ml、粒子中コレステロール濃度)の4段階に調整した。培養時間は2、4、6時間の3段階とした。培養終了後HUVECを集め、固定し、PAP法にてM-ELAM,ICAM-1などの接着因子の発現を観察したが、レムナント粒子の濃度による変化、培養時間による有意な変化は認めなかった。また、各培養終了後に培養液を回収し、培養液中のIL-1,TNF,TGF-betaを測定した結果、IL-1の増加が得られた。今後、培養細胞をHUVECからHCAECに換え、同様の実験を用意している。また、マウス腹腔マクロファージを採取し、前実験と同様の条件下(培養液中のレムナント量、培養時間)にてc-myc,c-fos,c-jun遺伝子のinductionを観察したが、これら早期反応遺伝子の増幅は得られなかった。これら培養実験に供した細胞の一部をそれぞれpropidiumiodine染色し、フローサイトメトリーにてアポトーシスを観察したが、培養液中のレムナント濃度の変化に伴うアポトーシスの増強を支持する明瞭な結果は得られなかった。方法を変えて再試する予定である。