腎マクラデンサの血管側Na-K-Cl輸送体及び管腔側Clチャネルのクローニング

• Project/Area Number: 07671266
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Kidney internal medicine
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 長谷川 元 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (30231517)
• Project Period (FY): 1995
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1995)
• Budget Amount: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000); Fiscal Year 1995: ¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
• Keywords: Na-K-2Cl cotransporter / macula densa / tubuloglomerular feedback / in situ hybridization / molecular cloning

Research Abstract

(1)既に明らかにされているNa-K-2Cl(NKCC)cotransporter family及びthiazide sensitive NaCl cotransporter(TSC)の塩基配列より保存性が高くかつ膜貫通部位と思われる5箇所を選びPCR primerを4通り作製した。
(2)ラット腎皮質及び腎髄質より得たmRNAよりcDNAプールを作製した。
(3)これと先に作製したPCR primerとでNKCC類似の塩基配列を持つDNA fragmentを増幅した。
(4)得られた断片をサブクローニングし、約120のDNA断片について制限酵素切断パターンを検討した。
(5)既知のNKCC familyと異なるパターンを示したものをprobeとして腎髄質cDNAを検討し、ほぼ腎皮質特異的と思われる断片を特定した。
(6)現在上記の断片のsequencingおよびmacula densaでの局在を確認するため、PCR-in situ hybridizationを行い、検討中である。