| Project/Area Number |
07671388
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Digestive surgery
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
梅下 浩司 大阪大学, 医学部, 助手 (60252649)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷川 隆彦 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
金 俊雄 大阪大学, 医学部, 助手 (50205051)
後藤 満一 大阪大学, 医学部, 助教授 (50162160)
門田 守人 大阪大学, 医学部, 教授 (00127309)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1995
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1995)
|
| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 1995: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
|
|---|
| Keywords | 肝虚血再潅流傷害 / oxidative stress / tert-butyl hydroperoxide / 初代培養肝細胞 / 細胞内カルシウム / 細胞質プロテアーゼ / calpain / 細胞骨格 |
|---|
| Research Abstract |
ラット初代培養肝細胞にtert-butyl hydroperoxide (TBHP)を負荷する系で、oxidative stressによる肝細胞傷害の機序を検討し、その抑制を試みた。TBHP負荷後約15分で細胞表面にsmall blebが形成され、30分後にはlarge blebが観察された。細胞質カルシウム濃度は、small blebの形成とほぼ同時に上昇し始め、large blebが形成される頃には約1μMに達した。LDHの遊離は、40分後から認められた。Bleb形成とLDHの遊離は、細胞外にカルシウムが存在する場合に顕著であり、EGTAでキレートすると抑制された。カルシウム存在下でも、細胞質プロテアーゼcalpainに特異的な阻害剤であるcalpeptinを添加することにより有意に抑制された。細胞膜の裏打ちをしているF-actinはbleb直下でも保たれていたが、細胞骨格蛋白のうちtalin、α-actininは、bleb発生と同時に減少した。Vinculinの減少は認めなかった。活性型calpainに対する抗体を用いたimmunoblotで、bleb形成に先だってcalpainの活性化が証明された。細胞骨格蛋白の減少は、細胞外カルシウムの除法、或いはcalpeptinの添加により抑えられた。
以上の結果より、oxidative stressによる肝細胞傷害について、カルシウムの流入→calpainの活性化→細胞骨格蛋白の分解→細胞死、というmechanismが考えられた。また、calpainの阻害による、傷害抑制の可能性が示された。現在、新しい阻害剤や内在性細胞質プロテアーゼに対するantisenseの導入など、更なるcalpain制御による細胞傷害抑制を研究中である。
|
