視床下部におけるLHRHmRNAの多様性:その生理的意義

Research Project

Project/Area Number	07770048
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Environmental physiology (including Physical medicine and Nutritional physiology)
Research Institution	Yokohama City University
Principal Investigator	船橋利也横浜市立大学, 医学部, 講師 (70229102)
Project Period (FY)	1995
Project Status	Completed (Fiscal Year 1995)
Budget Amount *help	¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000) Fiscal Year 1995: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywords	LHRH / ラット / PCR / 逆転写PCR / イントロン / 内側視索前野
Research Abstract	既知の視床下部LHRH遺伝子の塩基配列をもとにして様々なプライマーを設計し、卵巣摘除雌性ラットの内側視索前野のRNAを用いて逆転写PCR法により、LHRHの多様性について検討した。その結果、エクソン1と2の間を増幅すると通常のエクソンのみが増幅されると同時に、その間のイントロンAを含むものも増幅された。尚、直接塩基配列法によりPCR産物が意図したものかの確認を行った。次に、プライマーのN、C側がエクソン内のものやイントロン内のもので再度PCRを行ったところ、上記の結果と一致して、PCR産物にはエクソンのみのものの他にイントロンAを含むものが増幅された。従って、内側視索前野には通常のエクソンからなるLHRHmRNAの他に、イントロンAを含むものが存在するという結論を得た。次に、5′cDNA末端PCR法により、内側視索前野のLHRHmRNAの転写開始点の検討を行った。その結果、エクソン1の上流約100塩基のところに主な転写開始点が存在することが明らかとなった。しかしながら、定量性の問題が生じたため、7個のプライマーをLHRH遺伝子のプロモーター領域に設計し、PCR後サザンブロットにより検討しなおすことにした。現在、性周期中で、この転写開始点が変化するのか、内側視索前野(LHRHサージジェネレーター存在部位)と視床下部内側底部(LHRHパルスジェネレーター存在部位)のLHRHで、転写開始点に差があるのかを検討している。