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Two-hybrid systemを利用したPKC標的タンパク質の同定と解析

Research Project

Project/Area Number 07770110
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Pathological medical chemistry
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

鈴木 厚  横浜市立大学, 医学部, 助手 (00264606)

Project Period (FY) 1995
Project Status Completed (Fiscal Year 1995)
Budget Amount *help
¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1995: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
KeywordsTwo-hybrid system / PKC-binding protein / BTB / POZドメイン
Research Abstract

初期の目的を基本的に達成し、酵母Two-hybrid systemにより、PKCεのキナーゼドメインに特異的に結合する新規ヒトタンパク質、εBP1を、クローニングすることに成功した。タンパク質発現が困難なため生化学的な解析が遅れているが、以下の興味深い知見がすでに得られており、早急に発表したいと考えている。
1.εBP1は、新しいタンパク-タンパク相互作用interfaceとして近年注目されているBTB/POZドメインを含むタンパク質ファミリーの一員であった。このドメインは、ホモ/ヘテロ多量体形成活性を介して細胞内で大きな構造体を形成し、クロマチン構造制御を通じた遺伝子発現制御、あるいは細胞骨格系の形成に関与していることが指摘されている。ヒト白血病の2種の癌原遺伝子(Bcl6/LAZ3、およびPLZF)がこのファミリーに属することも報告されている。ノーザンブロットの結果からは、eBP1が脳、筋肉を中心として普遍的に発現していることが明からとなった。2.εBP1はそのN末端のBTB/POZドメイン周辺において非常に複雑な可変スプライシングを受け、多様なアイソフォームとして発現している。3.COS細胞に強制発現させると、εBP1はアイソフォーム依存的な、しかしBTB/POZドメインタンパク質に特徴的な細胞内局在、すなわち、核内粒子様構造への局在、あるいは細胞質での巨大な繊維状の会合体への局在を示した。一方、HelaあるいはCOS細胞で発現している内在性のεBP1は、核周囲の繊維状構造に局在した。これらの細胞に、活性型PKOε変異体を同時に強制発現させると、上記外来性、および内在性εBPの局在する構造体にこれら活性型PKCε変異体が強く取り込まれることも明らかとなった。以上の結果は、εBP1が、活性化したPKCεに局在する場を与えることを一つの機能とする、細胞内構造タンパク質であることを示唆している。

Report

(1 results)
  • 1995 Annual Research Report
  • Research Products

    (1 results)

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All Publications (1 results)

  • [Publications] Naoya Nishioka: "Wortmannin inhibits the activation of MAP kinase following vasopressin V1 receptor stimulation" FEBS Letters. 377. 393-398 (1995)

    • Related Report
      1995 Annual Research Report

URL: 

Published: 1995-04-01   Modified: 2016-04-21  

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