| Project/Area Number |
07780635
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Cell biology
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
駒田 雅之 関西医科大学, 医学部, 助手 (10225568)
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| Project Period (FY) |
1995
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1995)
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| Budget Amount *help |
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1995: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
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| Keywords | 増殖因子受容体 / シグナル伝達 / チロシンキナーゼ / チロシンリン酸化 / ジンクフィンガー / エンドソーム / 早期エンドソーム / 小胞輸送 |
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| Research Abstract |
HrsのZinc finger 領域は、高等動物や酵母におけるendosomeやvacuoleなどの細胞内小胞間の蛋白質輸送に関与するいくつかの蛋白質(EEA1、Fab1、Vps27、Vac1など)のzinc finger領域と50%近い相同性を有している。さらにHrsとVps27が全体で23%の相同性をもつことも見出された。したがってHrsも細胞内小胞輸送に関与している可能性が考えられた。そこで本研究では、Hrsの細胞内局在部位の同定を行った。
Hemagglutinin(HA)epitopeのタグをつけたHrsをHeLa細胞に発現させ、抗HA抗体を用いた間接蛍光抗体法でHrsの局在部位を検出した。その結果、Hrsは細胞内の小胞状構造に局在していた。この局在パターンは、早期endosomeのマーカーであるtransferrin receptorのそれと完全に一致しており、後期endosomeのマーカーであるCD63のそれとは部分的にしか一致しなかった。したがって、Hrsは早期endosome局在蛋白であることが明らかとなった。また細胞分画によってHrsは可溶性画分と膜画分にはほぼ等量ずつ回収されたが、膜画分のHrsもアルカリ処理により上清に溶出されてくることから、Hrsは早期endosomeとゆるく結合していることが予想された。一方、zinc finger 領域を欠失させたHrsの変異体もまたtransferrin receptorと同じ細胞内局在パターンを示し、zunc finger 領域はHrsの正しい細胞内局在には必要ないことが示された。
以上、Hrsが早期endosomeに局在すること、および酵母のendosomeからvacuoleへの蛋白質の小胞輸送に必須の因子Vps27と蛋白質全体に渡って相同性を有していることから、Hrsは、細胞内にインターナライズし早期endosomeに運ばれた増殖因子/受容体tyrosinekinase複合体によって早期endosome上でリン酸化され、その複合体の後期endosome、lysosomeへの輸送に関わっている可能性が考えられた。
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