創傷角膜におけるインターロイキン8の発現に関する研究

• Project/Area Number: 07857125
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Ophthalmology
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 山崎 俊秀 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (20271174)
• Project Period (FY): 1995
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1995)
• Budget Amount: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000); Fiscal Year 1995: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
• Keywords: 角膜 / アルカリ外傷 / インターロイキン8 / ELISA

Research Abstract

本研究では、アルカリ外傷角膜におけるIL-8の発現について検討した。
まず、家兎角膜アルカリ外傷におけるInterleukin8(IL-8)の発現についてRT-PCR法を用いて検討した。正常およびアルカリ外傷後7日の角膜を摘出、AGPC法を用いてtRNAを抽出しreversetranscriptionによってcDNAを作成した。プライマーはrabbitIL-8のcDNA塩基配列をもとに特異的プライマーを独自に作成した。アルカリ外傷は家兎角膜に1N NaOHを浸透させた直径10mmのろ紙を30秒間接触させて作成した。その結果、IL-8cDNAのサイズに一致するバンドをアルカリ外傷角膜にのみ認め、アルカリ外傷角膜においてIL-8 mRNAが発現していることが確認された。
次にELISA法を用いてアルカリ外傷角膜におけるIL-8発現についてタンパクレベルでの定量を行った。1995年7月にラットのIL-8 ELISA systemが市販されたため、ラット角膜アルカリ外傷モデルを用いて実験を行った。ラット角膜28眼に1N NaOHを浸透させた直径5mmのろ紙を60秒間接触させてアルカリ外傷を作成した。無処置の正常角膜4眼を対照とした。正常角膜および外傷後1、3、5、7、14、21、28日の角膜を摘出、凍結・粉砕したのちPBSに浮遊させ遠心し、その上清についてIL-8の定量を行った。その結果、正常角膜において53.8±9.7(mean±s.e.)pg/corneaのIL-8発現を認め、外傷後1日には295.6±46.3pg/coernea、外傷後5日に最大値455.8±124.2pg/coerneaに達した。しかし、外傷後14日のIL-8発現は18.7±2.1pg/coerneaと正常角膜の約3分の1のレベルであり、外傷後28日においても外傷後14日と同じレベルであった。
以上より、(1)正常角膜において約54pg/corneaのIL-8が発現する。(2)アルカリ外傷角膜では外傷後早期にIL-8が発現誘導され、外傷後5日に正常角膜の約8.5倍になる。(3)アルカリ外傷後14〜28日の瘢痕化角膜ではIL-8発現が正常の約1/3であることが明らかとなった。
現在、角膜におけるIL-8の局在を免疫組織化学的手法を用いて検討中である。