トマト黄化えそウイルスのゲノム複製とmRNA転写機構に関する生化学的研究

• Project/Area Number: 07J03587
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Plant pathology
• Research Institution: National Institute of Agrobiological Sciences
• Principal Investigator: 薦田 圭介 National Institute of Agrobiological Sciences, 植物科学研究領域, 特別研究員(PD) (40581640)
• Project Period (FY): 2007 – 2009
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2009)
• Budget Amount: ¥3,400,000 (Direct Cost: ¥3,400,000); Fiscal Year 2009: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2008: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2007: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: トマト黄化えそウイルス / ゲノム複製 / 転写 / 生化学 / 翻訳伸長因子

Research Abstract

トマト黄化えそウイルス(TSWV)のゲノム複製・mRNA転写機構の詳細は未解明な部分が多く,両反応に関与する植物側因子も殆ど同定されていない.前年度までに,TSWV感染植物体より精製したウイルスビリオンRNP(ゲノムRNAとN・Lタンパク質の複合体)とBYL(脱液胞化タバコ培養細胞抽出液)とを混合したところ,ウイルスのmRNA転写活性が検出され,またその活性付与因子は,40-60%飽和硫酸アンモニウム(硫安)では殆ど沈殿せず,80%飽和硫安によって沈殿する画分に含まれることを明らかにした.
今年度は,さらに当該因子の精製を進めるため,転写活性を指標にして,BYLの各種クロマトグラフィーによる分画を試みた.その結果,80%飽和硫安沈殿画分を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し,続いてゲル濾過クロマトグラフィーに供した場合に,ほぼ単一因子にまで精製を進めることに成功した.そしてウェスタン解析を行った結果,当該因子が宿主の翻訳伸長因子eEF1Aであると強く示唆された.
eEF1Aがプラス鎖RNAウイルスの複製反応に寄与しているとの報告は数例存在するが,マイナス鎖RNAウイルス転写反応への寄与を示唆する結果は,動物ウイルスである水泡性口内炎ウイルス(Vesicular Stomatitis Virus)に次いで2例目であり,またTSWVの属するブニヤウイルス科では,初めてである.
以上の結果は,現在論文投稿準備中である.

Research Products

• [Journal Article] トバモウイルスのゲノム複製機構 (2007)
  • Author(s): 藤崎恒喜
  • Journal Title: 蛋白質核酸酵素 2007年8月号増刊「ウイルス研究の現在と展望」 52 Pages: 1149-1154
• [Presentation] 脱液胞化植物細胞抽出液を用いたトマト黄化えそウイルスのゲノム複製・転写機構の解析 (2008)
  • Author(s): 薦田圭介
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 兵庫県神戸市
  • Year and Date: 2008-12-12
• [Presentation] トマトモザイクウイルス(ToMV)RNA複製複合体形成機構の解析 (2007)
  • Author(s): 薦田圭介
  • Organizer: 第4回ウイルス学キャンプin湯河原
  • Place of Presentation: 静岡県熱海市