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ランダム変異を用いたリゾチームのフォルディング情報の解析

Research Project

Project/Area Number 08272225
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

井本 泰治  九州大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (90038282)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 橋本 喜夫  九州大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (50253472)
伊東 祐二  九州大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (60223195)
植田 正  九州大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (90184928)
Project Period (FY) 1996
Project Status Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 1996: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Keywordsリゾチーム / フォルディング / ランダムライブラリー
Research Abstract

本研究は、ランダム変異リゾチームをスクリーニングし、蛋白質のフォルディングに関与している残基のマッピングを行うことで、高次構造又は2次構造のどの辺はどのような変換が可能か又は不可能かについての情報を蓄積することを目的としている。そのため、酵母から分泌できないリゾチームをランダムライブラリーからスクリーニングした。すなわち、既に確立しているストレプトマイシン依存性大腸菌を用いたクローニング方法と、活性及びELISAによるスクリーニング系により、活性及び分泌量の減少したものを選び出した。DNAシークエンスの結果、2変異体Asp18His/Leu25ArgおよびAla42Val/ser50Ile/leu56Glnが得られた。これらの変異体を既に開発済みの大腸菌の発現系で生産・単離し、尿素及びグリセロール存在下でin vitroでの巻き戻しを行い、陽イオン交換HPLCにより解析した結果、両変異体ともその変異が原因で不安定となったため酵母から分泌しなかったと考えられた。さらに、これらの変異体のそれぞれの1アミノ酸変異体を作製し同様な解析を行った。この結果、Leu25ArgとLeu56Glnがその不安定さに寄与していて、それ以外の変異は野生型と同様な傾向を示した。このように、多重変異体が得られた場合、それぞれの1アミノ酸変異体を作製し解析することは必要であると思われる。以後、さらにスクリーニングを続けていく予定である。

Report

(1 results)
  • 1996 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All Other

All Publications (4 results)

  • [Publications] Ueda,T.,et al.: "Identification of the peptide region that folds in the early stage of the renaturation of reduced lysozyme" Biohem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Maeda,Y.,et al.: "Effect of additives on the renaturation of reduced lysozyme in the presence of 4M urea" Protein Engng.9. 461-465 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Maeda,Y.,et al.: "Effective renaturation of denatured and reduced immunoglobulin G in vitro without assistant of chaperone" Protein Engng.9. 95-100 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Ueda,T.,et al.: "Stabilization of lysozyme by introducing N-glycosylation signal sequence" J.Biochem.119. 157-161 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report

URL: 

Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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