DNAと蛋白質の相互作用からみたセントロメア/動原体の機能分子構造

• Project/Area Number: 08277222
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Osaka Prefecture University
• Principal Investigator: 杉本 憲治 大阪府立大学, 農学部, 講師 (40196746)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 1996: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
• Keywords: セントロメア / 動原体 / DNA蛋白質 / 機能分子構造

Research Abstract

1.セントロメア蛋白質が結合するDNAについて
ヒトCENP-Bについてはセントロメア領域のDNAに存在する幾つかの配列に結合することが知られているが、その結合配列の詳細は不明であった。そこで、先に開発した「ヒト組換え体CENP-Bを用いたDNAアフィニティー沈降法」を用いて,新たに結合する配列を20個程同定した。また,同様の手法を用いて,ヒトゲノムライブラリーより、直接,CENP-Bの結合する配列として「セントロメアDNA」を複数単離した。一つは染色体6番に由来するもので,その3kbの繰り返しにおけるCENP-Bの結合配列の分布を正確にマップした。今一つは複数の染色体のセントロメアに局在性を示すもので,現在,解析中である.
2.セントロメア蛋白質間の相互作用について
CENP-CとHP1の分子間相互作用について,DSSを用いた化学架橋法あるいは,ゲル濾過法により解析を行った.その結果,CENP-Cは中央のDNA結合領域に加えて,C末端に二量体形成領域が存在することが明らかとなった.N末端にも自己会合能の存在が示唆された.また,HP1についても,中央のDNA結合領域に加えて,自己会合能を持つ可能性が示された.
3.その他のセントロメア蛋白質について
CENP-A蛋白質のDNA結合能を解析するため,そのcDNAをクローン化した現在,組換え体蛋白質を発現させ,その機能の解析を行っている.

Research Products

• [Publications] K.Sugimoto, Y.Hagishita, and M.Himeno.: "Functional domain strucuture of human centromere protein B : Implication of the internal and C-terminal self-association domains in centromeric hetero-chromatin condensation." Journal of Biological Chemistry. 269. 24271-24276 (1994)
• [Publications] K.Sugimoto, K.Furukawa, and M.Himeno: "Functional cloning of centromere protein B (CENP-B) box-enriched alphoid DNA repeats utilizing the sequence-specific DNA binding activity of human CENP-B in vitro." Chromosome Research. 2. 453-459 (1994)
• [Publications] K.Sugimoto, H.Yata, Y.Muro, and M.Himeno: "Human centromere protein C (CENP-C) is a DNA-binding protein which possesses a novel DNA-binding motif." Journal of Biochemistry. 116. 877-881 (1994)
• [Publications] K.Sugimoto, T.Yamada, Y.Muro, and M.Himeno.: "Human homolog of Drosophila heterochromatin-associated protein 1 (HP1) is a DNA-binding protein which possesses a DNA-binding motif with weak similarity to that of human centromere protein C (CENP-C)." Journal of Biochemistry. 120. 153-159 (1996)
• [Publications] Kenji Sugimoto: "DNA-protein interaction involed in centromere heteochromatin organization of human chromosome." Viva Origino. 24. 211-224 (1996)
• [Publications] K.Sugimoto, K.Kuriyama, A.Shibata, and M.Himeno: "Characetrization of internal DNA-binding and C-terminal dimerlzation domains of human centromere/kinetochore autoantigen CENP-C in vitro : Role of DNA-binding and self-associating activities in kinetochore organization." Chromosome Research. 5. 1-10 (1997)
• [Publications] Kenji Sugimoto: "DNA immunoprecipitation : Application to characterization of target sequences for a human centromere DNA-binding protein (CENP-B). in ″Cell Biology : A Laboratory Handbook″" J. E. Celis, Academic Press, 9 (1994)
• [Publications] K.Sugimoto, Y.Muro, M.Ohashi, and M.Himeno.: "Scleroderma diagnosis with recombinant protein. in ″Encyclopedia of Molecular Biology and Molecular Medicine″." R. A. Meyers, VCH Publishers, 11 (1997)