| Project/Area Number |
08671149
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
内分泌・代謝学
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
吉政 康直 京都大学, 医学研究科, 助手 (00252437)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
細田 公則 京都大学, 人間環境学研究科, 助手 (40271598)
西 重生 京都大学, 医学研究科, 講師 (80218099)
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| Project Period (FY) |
1996 – 1997
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1996)
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| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1996: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | インスリン / シグナル伝達 / 3T3-L1脂肪細胞 / MAPキナーゼ・キナーゼ / MAPキナーゼ / PI3キナーゼ / 糖輸送担体 |
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| Research Abstract |
1.Constitutive active MAPキナーゼ・キナーゼ(MAPKK)を用いたMAPキナーゼが関与するインスリン作用の検討
MAPキナーゼ経路において、MAPKKはそのリン酸化部位(S218,S222)にグルタミン酸を導入することでconstitutive activeになることが示されている。Xenopus MARKK cDNAを用いて、N端アミノ酸を欠失させ(32-51)、セリン(218,222)をグルタミン酸に置換したもの(ΔSE^2)を作製した。ΔSE^2を組み込んだ高力価のvirus solutionを3T3L1前脂肪細胞にinfectすることで、脂肪細胞に高率に分化する細胞株を樹立した。
これらの細胞株は内因性MAPKKとともにΔSE^2蛋白を発現しており、糖輸送はインスリン非存在下で親株である3T3L1脂肪細胞のインスリン刺激時の糖輸送と同等であり、MAPキナーゼは糖輸送担体(GLUT1,GLUT4)のトランスロケーションに関与していることが示唆された。また、これらの細胞株はMAPキナーゼのグリコーゲン合成、脂肪細胞特異的遺伝子発現への関与を検討するのに有用である。
2.インスリンシグナル伝達におけるP13キナーゼ経路とMAPキナーゼ経路の相互作用の検討
PI3キナーゼ特異的阻害剤であるwortmanninを用いて、3T3L1脂肪細胞においてインスリンによるMAPキナーゼ経路の活性化にPI3キナーゼが関与していること、PI3キナーゼはMAPキナーゼ経路のraf-1キナーゼの活性化に必要であることを示し、両経路に相互作用が存在することを示した。また、この相互作用にリガンド特異性、細胞特異性が認められることも示した。
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