| Budget Amount *help |
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 1996: ¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
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| Research Abstract |
1.PRAD1/サイクリンD1関連腫瘍の遺伝子診断の確立:我々が考案したcompetitive RT-PCR法では,RNA10ngもしくは全血1μl相当から1回のRT-PCRですべてのD型サイクリンの相対的発現量をアガロースゲル上で検出できるため,少量の検体でPRAD1/サイクリンD1関連腫瘍の診断をすることができる.45株の血液系細胞株と104症例の臨床検体から抽出したRNAを解析すると,11;14転座を有する腫瘍細胞(2細胞株および7症例の臨床検体)では明らかなサイクリンD1の過剰発現パターンが検出された.さらに染色体分析では解析できなかった症例も含めて6例の新たなサイクリンD1過剰発現例が見いだされた.また,103例の末梢血と30例の骨髄をスクリーニングしたところ,3例の陽性例を検出しえた.11;14転座型腫瘍細胞の希釈実験では,腫瘍含量50%以上でサイクリンD1過剰発現が明瞭に検出することができた.さらに,HTLV-1感染T細胞株でサイクリンD2の過剰発現が検出され,サイクリンD1過剰発現だけでなく,サイクリンD2の異常発現も検出することができる.以上から,このRT-PCRは信頼のおける臨床検査法として有用できることが確認された(Blood1997 in press).2.血液細胞におけるD型サイクリンの発現様式の検討;臍帯血由来CD34陽性細胞を用いて,上記RT-PCRを改良したnested RT-PCRを新たに開発し,正常ヒト造血細胞でのD型サイクリンの発現を解析した.サイトカインの刺激によってCD34陽性細胞でサイクリンD1の発現が誘導された.さらにCD34陽性細胞由来の366colonyを解析し,解析可能な120colonyの結果から,CFU-GEMM,CFU-GM,BFU-EやCFU-MegにサイクリンD1は発現するものの,CFU-GではサイクリンD1を発現しないことが明らかとなった.これは,末梢血中の細胞の解析と一致し,顆粒球系細胞の成熟の早期でサイクリンD1の発現が消失することを示している.
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