ヒトコンドロモジュリン-I遺伝子の構造決定

• Project/Area Number: 08671656
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Orthopaedic surgery
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 飯田 寛和 京都大学, 医学研究科, 助教授 (60176047)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 開 祐司 大阪大学, 歯学部, 助教授 (40144498)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000); Fiscal Year 1996: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
• Keywords: ヒト高分化型軟骨肉腫 / クローニング / ヒトChM-IcDNA / ヒトChM-I遺伝子

Research Abstract

1)ヒトコンドロモジュリンI(ChM-I)cDNAのクローニング
ヒト高分化型軟骨肉腫よりmRNAを抽出し、γファージに組み込みcDNAライブラリーを作成した。ウシChM-Iの5′側をプローブにしてライブラリーのスクリーニングを施行したところポジティブクローンを取得した。塩基配列を確認したところ、このクローンは塩基長1.5kbでありヒトChM-Iをコードしていることが明らかとなった。
2)ヒトChM-I遺伝子のクローニング
Clontech社よりEMBL3に組み込まれたヒト胎盤由来のヒトゲノムライブラリーを購入し、ヒトChM-I cDNAをプローブとしてライブラリーのスクリーニングを施行したところ、ポジティブクローン1つを取得した。このクローンの制限酵素地図を作成した後、塩基配列を確認したところ、3′側5.7kbにN端codingexonと次のexonとが含まれていることが確認された。現在このクローンより3′側をgenomic walkingによってクローニングを行っている。