21番目のアミノ酸の翻訳に関与する新規RNA結合因子の研究

• Project/Area Number: 08680644
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Structural biochemistry
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 高橋 和彦 北海道大学, 薬学部, 助教授 (10113581)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000); Fiscal Year 1996: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
• Keywords: セレン / RNA結合因子 / 翻訳 / グルタチオンペルオキシダーゼ / セレノシステイン

Research Abstract

セレノシステイン(Sec)はmRNAの読み取り枠内の終止コドンUGAでコードされており,翻訳され得る21番目のアミノ酸である.真核生物では,どのようなメカニズムでSecが取り込まれるかは現在,不明である.Sec含有蛋白のmRNAの3′-非翻訳領域にstem-loop構造をとり得る特異配列(Sec insertion sequence ; SECIS)が認められ,この配列の存在がUGAをSecとして取り込むために必要なことが示されている.
今回,我々はこのSECISに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA stem-loop部分89 baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーにより解析したところ,約55KDaの位置に単一のバンドが検出された.しかし,フリーに対する複合体の割合は著しく低かった.そこで他の種々Sec含有蛋白のSECISのついてゲルシフト法で解析を行った.その結果,ヒト血漿セレン含有蛋白Selenoprotein P (SeP)のSECISをプローブとした場合最も強い結合活性が認められた.現在,biotin化したSePのSECISを合成し,これを出発材料と反応後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子の分離を試みている.この精製に成功したら,その生化学的性質を調べ,遺伝子をクローニングし構造を決定する予定である.

Research Products

• [Publications] K.Takahashi: "Cytosolic Factor to Bird 3′UTR of Selenocysteine-containing Protein" The Sixth International Symposium on Selenium Abstract Book. 15-15 (1996)
• [Publications] K.Takahashi: "Isolation and Characterization of Selenoprotein P from Human Plasma" The Sixth International Symposium on Selenium Abstract Book. 27-27 (1996)
• [Publications] 毛利 祐子: "セレノシステイン(Sec)含有蛋白質のmRNA 3′UTRに結合する細胞質因子の検索" 第69回日本生化学会第19回日本分子生物学会合同年会講演要旨集. 462-462 (1996)