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肺サーファクタント蛋白質D受容体を介するマクロファージ調節機構の解析

Research Project

Project/Area Number 08770107
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Pathological medical chemistry
Research InstitutionSapporo Medical University

Principal Investigator

小笠原 由法  札幌医科大学, 医学部, 講師 (20224090)

Project Period (FY) 1996
Project Status Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help
¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 1996: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
KeywordsC型レクチン / サーファクタント蛋白質 / 受容体 / 脂質結合蛋白質 / マクロファージ
Research Abstract

本研究は、肺胞II型細胞で合成、分泌される肺サーファクタント(脂質-蛋白質複合体)に含まれるC型レクチンSP-Dに着目し、肺胞細胞における機能発現、特にマクロファージを介するSP-Dの生理機能の解明を目的とした。以下に述べる新たな知見を得る成果を上げたが、受容体解析については今後の課題となった。
1.遺伝子組み換えヒトSP-DをCHO細胞を用いて発現した。発現された遺伝子組み換え蛋白質は分子量、抗ヒトSP-Dモノクローナル抗体との反応性においてNative SP-D)と全く相同であった。ヒト肺胞洗浄液からSP-Dを精製することが非常に困難なことから、大量に調製可能な組み換えSP-D発現によって、その構造・機能解析が容易となった。
2.変異導入遺伝子組み換えSP-Dを1と同様にCHO細胞を用いて発現、精製した。変異蛋白質としてはSP-Dの1)コラーゲン領域欠損体、2)ネック領域欠損体、3)N端分子間ジスルフィド結合欠損体、4)CRD領域におけるヒトSP-Aとのキメラ体を調製し、それぞれの構造と検討した。とくに4)において、ヒトSP-Dの糖質結合特異性責任領域からN端へのアミノ酸10残基(Glu310-Pro319)がSP-Dの脂質結合能に関与していることが示唆された。
3.^<35>S標識遺伝子の組み換えSP-Dと肺胞細胞ホモジネートとのリガンド結合実験によい、分子量約14万のSP-D結合蛋白質の存在が明らかとなった。現在この蛋白質の解析に取り組んでいる。

Report

(1 results)
  • 1996 Annual Research Report
  • Research Products

    (5 results)

All Other

All Publications (5 results)

  • [Publications] 永江 尚人: "肺サーファクタント蛋白質D(SP-D)の血清濃度測定キットの開発" 医学と薬学. 36・4. 803-806 (1996)

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  • [Publications] 本田 泰人: "肺疾患の診断における肺サーファクタント蛋白質D(SP-D)血清濃度測定キット「ヤマサ」の有用性" 医学と薬学. 36・4. 809-815 (1996)

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  • [Publications] Akiko HATTORI: "Human surfactant protein A with two distinct oligomeric structures which exhibit diffrent capacities to interact with alveolar typeIII cells" Biochem.J.317. 939-944 (1996)

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  • [Publications] Yoshio Kuroki: "Interaction of phospliolipid liposomes with plasma membrane isolated from alveular type II cells : effect of pulmonary surfactant protein A." Biochem.Biophys.Acta. 1281. 53-59 (1996)

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  • [Publications] Yoshioo Kuroki: "Stracture-fanction analysis of surfactant protein A by site directed mutagensis" J.Jpn.Med.Soc.Biol.Interface. 26. 15-23 (1996)

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      1996 Annual Research Report

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Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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