CD45チロシンホスファターゼによるB細胞基質タンパク質の制御機構

Research Project

Project/Area Number	08770243
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Immunology
Research Institution	Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
Principal Investigator	片桐達雄 (財)東京都神経科学総合研究所, 微生物・免疫学研究部門, 主事研究員 (00233742)
Project Period (FY)	1996
Project Status	Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help	¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000) Fiscal Year 1996: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywords	B細胞抗原受容体 / シグナル伝達機構 / CD45 / Lyn / 未熟B細胞 / WEHI-231 / 成熟B細胞 / BAL-17
Research Abstract	B細胞抗原受容体(BCR)を介したシグナル伝達機構におけるCD45の役割の解明を目的として、未熟および成熟B細胞株より、それぞれ樹立したCD45陰性クローンを用いた解析を行い以下の結果を得た。 1.未熟B細胞株WEHI-231におけるCD45の生理的基質 1)BCRを構成する各種チロシンリン酸化酵素(PTK)を解析した結果、CD45陰性クローンでは親株と異なり、Lynの恒常的なリン酸化と活性の上昇が認められた。ホスフォアミノ酸解析の結果、この恒常的なリン酸化はチロシン残基に特異的であった。さらに、CD45陰性クローンを^<32>Pで代謝的ラベルして、無刺激時におけるLynのチロシンリン酸化部位の決定を行った。この結果、Lynの自己リン酸化部位(ポジィティブ制御部位)であるY397とネガティブ制御部位であるY507の双方のリン酸化が認められた。これらの結果は、未熟B細胞においてはCD45はこの両方の部位の脱リン酸化に関与していること、およびY397・Y507の双方がリン酸化されたLynは活性が亢進していることを明らかにした。 Lyn以外の基質とLynの下流シグナルの解析では、Blk、PLC-γ1およびBtkの活性とリン酸化量を比較検討したが、CD45の有無による有意な差は検出できなかった。これは、LynがB細胞ではCD45の特異的な基質であることを示唆している。現在、PLC-γ2、P13KおよびHS1等について検討中である。 2.成熟B細胞株BAL-17のCD45陰性クローンでチロシンリン酸化を受けないタンパク質の解析このタンパク質は親株ではBCR刺激後、10分以降に顕著なリン酸化が認められた。各種抗体を用いたウエスタン解析の結果、Lyn、Fyn、SykおよびBtkとは一致せず、このタンパク質のバンドはFynとSykの中間に位置した。現在、このタンパク質の同定方法について検討中である。