アンジオテンシンII受容体蛋白翻訳調節の分子機構

Research Project

Project/Area Number	08770525
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Circulatory organs internal medicine
Research Institution	Kansai Medical University
Principal Investigator	森泰清関西医科大学, 医学部, 助手 (40268371)
Project Period (FY)	1996
Project Status	Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help	¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000) Fiscal Year 1996: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywords	アンジオテシンII / 受容体 / 蛋白翻訳
Research Abstract	1.upstreamATGの点変異遺伝子作成: ラット・アンジオテンシンtype 1A受容体(AT_<1A>R)遺伝子エクソン1に存在するshort open reading frame(sORF)の開始コドンであるATG(upsteam ATG)の点変異をPCR法により作成。sORFを含んだ201bpのPCR産物を後述のCATレポーター遺伝子およびAT_<1A>A cDNAの5'上流に組み換え、発現プラスミドを得た。この際、実験の対照として、同領域の野生型の組み換え体も用意した。 2.upstreamATG変異のAT_<1A>R発現に及ぼす効果: 1)CAT発現系による評価…p201CAT(野生型)及びp201mCAT(変異型)をラット血管平滑筋(A10)細胞にリン酸カルシウム法により導入。導入した細胞のCAT活性を求め、並行して抽出した全RNAからCATmRNAレベルの変化を定量、比較した。結果、upstreamATGの点変異はCAT活性を約2.6倍に増加させたが、CATmRNAレベルには差を認めなかった。 2)AT_<1A>R発現系による評価…pcAT_<1A>R(野生型)及びpcAT_<1A>Rm(変異型)をCos-7細胞に1)と同様に導入。発現したAT_<1A>R蛋白をウエスタン・ブロット法により定量すると変異型では野生型に比し、約2.5倍に増加した。しかし、AT_<1A>R mRNAレベルには変化を認めなかった。 3.合成sORFペプチドのAT_<1A>R発現に及ぼす効果: 上述のsORFによりコードされる11アミノ酸からなるペプチドを合成し、pcAT_<1A>Rmを鋳型としたreticulocytelysateによるin vitro転写・翻訳系の反応液中に添加。0〜30μmol/Lの同ペプチドは、AT_<1A>R蛋白産生量を濃度依存性に非添加群の24%まで抑制した。以上の結果は、ラットAT_<1A>RのupstreamATGより始まるsORFが、AT_<1A>R蛋白翻訳に抑制効果を有する可能性を示唆するものと考えられる。