| Project/Area Number |
08770944
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
General surgery
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
塩谷 尚志 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (70226108)
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| Project Period (FY) |
1996
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1996)
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| Budget Amount *help |
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1996: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
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| Keywords | IL-6 / IL-8 / EGR-1 / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
正常ヒトリンパ球よりTotal RNAをIsogen kittで抽出、IL-6、IL-1βに特異的なprimer(20mer)を作製しsense,antisenseとして使用し、RT-PCRを施行した。これにより得られたIL-6、IL-1βのc-DNAをexpression vectorに挿入し実際のIL-6、IL-1βの蛋白発現を抗体により確認した。次に放射線感受性を持つプロモーターEGR-1と上記のIL-6、IL-1βのc-DNAをligationさせた。この後肺扁平上皮癌の細胞株であるTOW-3にLipofectin法によりEGR-1-IL-6、EGR-1-IL-1βc-DNAの導入を試みた。しかしこれらの導入効率は5%以下と悪くほとんど導入細胞に蛋白の発現が認められなかった。このためelectropolation法を遺伝子導入のため試みたが導入細胞の致死率が80%以上と高く実用的ではなかった。このため現在米国harvard大学医学部Kufe博士より供与された病原性の認められないadeno virusをvectorとして使用して遺伝子導入を試みている。この結果約30%のTOW-3に遺伝子導入が成功しIL-6、IL-1βの遺伝子発現が、Southern blotting,Northern blotting,Western blottingでも確認された。このためIL-6、IL-1βの導入されたTOW-3をcloningし現在nude-mouseに移植予定である。
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