抗神経接着分子抗体による神経芽腫のアポトーシス誘導実験

• Project/Area Number: 08771552
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 小児外科
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 金井 正樹 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (60256360)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 1996: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: アポトーシス / 神経芽腫 / C1300 / N-CAM

Research Abstract

1)In vitroにて抗N-CAM抗体作用後の腫瘍細胞増殖の観察
10%のbasal mediumを加えたRPMIにて培養したC1300細胞株(cell line N2A)に、抗N-CAMモノクローナル抗体を加え作用させた。コントロールIgG抗体を同様に作用させた細胞株はaggregationを起こしていたのに対し、抗N-CAM抗体を作用させた細胞株では細胞間に隙間を認め、aggregationが抑制されているのが観察された。
2)In vivoでの腫瘍細胞増殖の観察
1x10^6のC1300腫瘍細胞をA/Jマウスの腹腔内に移植し、第4病日に抗N-CAMモノクローナル抗体を腹腔内投与した(n=20)。コントロールとしてIgG抗体を同様に作用させ、第14病日に腹腔内の腫瘍増殖を観察した(n=20)が、両群とも腹腔内での腫瘍増殖、各臓器への転移を認めなかった。コントロール群においても腹腔内での腫瘍増殖が認められなかったため、移植腫瘍細胞数、および屠殺までの期間などに関し、再度検討する必要がある。
3)DNA cleavageの観察
1)と同様にして、抗N-CAMモノクローナル抗体を作用させた腫瘍細胞のDNAを抽出し電気泳動を行ったところ、アポトーシスに特有のladder patternが形成された。
4)Apoptotic bodyの観察
1)と同様にして、抗N-CAMモノクローナル抗体を作用させた腫瘍細胞を電子顕微鏡で観察したところ、apoptotic bodyの形成を認めた。
5)結論
上記1)3)4)により、in vitroにおいては抗N-CAMモノクローナル抗体は神経芽腫C1300腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することが確認された。しかし、臨床に応用させ治療に結びつけるためには、in-vivoにおける証明も必要である。これらは今後の課題と考える。