口腔前癌病変における各種癌抑制遺伝子の検索

• Project/Area Number: 08771565
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Morphological basic dentistry
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 寺島 龍一 富山医科薬科大学, 付属病院, 助手 (50211389)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000); Fiscal Year 1996: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
• Keywords: p53 / PCR / SSCP / PCR-SSCP

Research Abstract

口腔前癌病変28例(severe dysplasia9例、moderate dysplasia5例、milddysplasial4例)からDNAを抽出し癌抑制遺伝子P53をPCR-SSCP法にて解析した。
1.DNAの抽出
ホルマリン固定後にパラフィン包埋された標本を薄切(4-5μm)、yleneにて脱パラ後粉砕し、proteinaseKに溶解してDNAを抽出した。
2.P53遺伝子のPCR-SSCP
抽出したDNA(0.1-1μg)、50mM KCl、10mM TrisHCl、1.5mM MgCl_2、dNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2mM、0.01%gelatin、primer各25-100pmole、TaqDNApolymerase2.5-5単位を100μlの反応液とし、これに〔α-32P〕dCTP(10mCi/μl)0.1μlを添加してThermal Cyclerを使用して反応を行った。PCR産物はformamide-色素溶液で100倍に希釈し100℃10分加熱変性後、6%polyacrlyamideゲル中にて電気泳動した。電気泳動後、ゲルを乾燥しオートラジオグラフィーを行いバンドを検出した。
3.結果
口腔前癌病変28例中5例(17.9%)にp53遺伝子の変異を認め、これらはすべて第5エクソンに認められた。dysplasiaの程度別ではsevere dysplasiaに3例認め、moder ate dysplasia、mild dysplasiaに各1例認めた。