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バクテロイデス・フォーサイサスのBApNA分解酵素の精製と性質

Research Project

Project/Area Number 08771646
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 病態科学系歯学(含放射線系歯学)
Research InstitutionThe University of Tokushima

Principal Investigator

玉谷 香奈子 (大和 香奈子)  徳島大学, 歯学部, 助手 (40243711)

Project Period (FY) 1996
Project Status Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1996: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywordsバクテロイデス・フォーサイサス / BApNA分解酵素 / 歯周病
Research Abstract

本研究では、歯周病原性細菌の一つであるBacteroides forsythusの産生するBApNA分解酵素を精製し、その酵素学的な性状を検討した。その結果、以下の様な事実が判明した。(1)酵素の局在を検討した結果、本酵素は細胞質画分にその大部分(60%)が存在した。(2)TNBSを用いた阻害試験では、intactな菌体には阻害が全く認められなかった。このことから、本酵素は菌体内部に存在し、外界へ露呈していないと考えられた。(3)精製した酵素は、SDS-pageでは、分子量59KDaのメインバンドとその他複数のバンドが認められ、Arg-CH_2Clによるアフィニティーブロッティングでは、59KDaのバンドのみ反応が認められた。(4)ゲル濾過による推定分子量は60KDaであった。(5)阻害試験の結果、Serine-thiol protease inhibitorのうち、Antipain,Leupeptinで阻害がみとめられ、α_1-Antitrypsin,Elastatinalでは阻害は起きなかった。Serine protease inhibitorのうち、TLCKで阻害が認められPMSFでは阻害は認められなかった。また、Thiol protease inhibitor,Trypsin inhibitor,Plasma protease inhibitorの3群のうちからは、阻害を示す物質を見いだせなかった。また、Thiol依存性も存在しなかった。(6)合成基質を用いた基質特異性試験から、本酵素はArg,Lysに特異的であることが判明した。(7)Angiotensin等の短鎖ペプチドの切断試験から、本酵素はペプチド鎖内のArgのC末端を切断するEndopeptidaseであると考えられた。(8)Casein,Gelatin等の蛋白に対する分解活性を証明することはできなかった。結論:本菌の産生するBApNA分解酵素はP.gingivalisのトリプシン様酵素とは、かなり性質が異なっており、むしろT.denticolaによく似ていると考えられた。このことは、本菌がP.gingivalisが存在する部位でよく検出されることと関係があるかもしれない。

Report

(1 results)
  • 1996 Annual Research Report

URL: 

Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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