哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析

• Project/Area Number: 08780679
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Cell biology
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 松岡 洋祐 大阪大学, 医学部, 助手 (60263258)
• Project Period (FY): 1996
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1996)
• Budget Amount: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 1996: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: 核膜 / 核膜孔複合体 / 細胞分裂

Research Abstract

分裂期Hela細胞の抽出液をいくつかの画分に分画し、それらを抗原として抗核膜抗体を調製したところ、核膜孔を認識するモノクローナル抗体(MY95)が得られた。核膜孔には核膜孔複合体(NPC)と呼ばれる分子量約125MDa、100種類以上の蛋白質からなる巨大な複合体が存在し、これが核膜孔における物質輸送を制御している。細胞分裂期には核膜の崩壊とともにNPCも崩壊し分裂間期に向かう過程で再構築される。NPCの崩壊と再構築が正しく行われなければ細胞は致死となるので、この崩壊、再構築には精巧な制御機構が存在すると考えられる。哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析をNPCの崩壊と再構築の解析という観点から行った。NPCは100種類以上の蛋白質からなる複合体だがMY95は主としてそのうちの三種類の蛋白質を認識した。次にこの抗体を用いて分裂期における核膜孔複合体の存在様式を明らかにするため分裂期細胞抽出液をゲル濾過法で分画して解析した。その結果、これらの蛋白質を含む分子量400kDa以上のサブコンプレックスが少なくとも三種類存在することが明らかとなった。各サブコンプレックス構成蛋白質のうち、いくつかをイオン交換カラム、ゲル濾過カラム、電気泳動法で完全精製し、アミノ酸配列の決定を行っている。今回得られた結果により細胞分裂期におけるNPCの存在様式を把握でき、これは今後NPCの崩壊、再構築機構を解析する上での基礎データとして重要なものである。