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エンドペプチダーゼ組み合わせ法によるレセプターラベル部位の決定

Research Project

Project/Area Number 08877336
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 医薬分子機能学
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

橋本 祐一  東京大学, 分子細胞生物学研究所, 教授 (90164798)

Project Period (FY) 1996 – 1998
Project Status Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1998: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 1997: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 1996: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Keywordsエンドペプチダーゼ / アフィニティラベル / レチノイン酸レセプター / プロテアーゼ / レセプター / プローブ / ケイ光標識 / ペプチド / 光親和性ラベル / アフィニティーゲル / レチノイド / レチノイン酸受容体 / 質量分析 / 結合部位 / フタルイミド / 分子認識
Research Abstract

本年度は、提唱するエンドペプチダーゼ組み合わせ法によるレセプターラベル部位の決定法を、方法論として確立すべく、ここのステップの施行条件の最適化を図るとともに、同方法の応用・適応範囲の拡充並びにそれによる新規知見の獲得を目指した。
方法論としての確立のためには、核内レチノイン酸レセプターを素材とした研究を展開した。その結果、
(1) 提唱する方法に用いるラベル化剤及びその有効性を事前に検討するためのブローブの一般設計法並びに一般調製法を確立した。
(2) 提唱する方法に用いるエンドプロテアーゼの一般使用法、一般反応条件などを確立すると共に、酵素反応物の一般取扱法、一般分析法を確立した。
(3) 提唱する方法により一層の信頼性を付与すべく、同方法にエレクトロスプレー質量分析によるエンドプロテアーゼ消化物の分析法を導入することを検討し、これらの方法が相乗的に得られる結果の信頼性を高めることを確認し、両方法の一般的融合利用法を大旨確立した。
確立した方法の応用としては、a)TNF-αの生産調節にかかわる薬物受容体の検出、b)アミノペプチダーゼN阻害剤の新たな分子標的の検出、に成果があった。すなわち、
(4) TNF-αの生産促進並びに生産抑制にかかわる薬物受容体各々の検出に成功した。
(5) 小分子非ペプチド型アミノペプチダーゼN(APN)阻害剤の分子標的として、APN活性を有しながらこれまでAPNとして確認されている酵素とは異なるものを発見した。

Report

(3 results)
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • 1996 Annual Research Report
  • Research Products

    (16 results)

All Other

All Publications (16 results)

  • [Publications] Yuichi Hashimoto 他1名: "Pnotoaflinity lubeling of RARs and mapping of labeled sites by an endoproteinase〜" Methods in Molecular Biology. 89. 293-305 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Ryuichi Shirai 他3名: "Sequence selective interaction between nucleotides and interaction〜" Nucleosides and Nucleotides. 17・1-3. 593-601 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Ryuuta Fukutomi 他7名: "Aromatic layered guanidines bind sequence-specifically to DNA〜" Tetrahedron Letters. 39・36. 6475-6478 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Yasuyuki Fujimoto 他8名: "Purification and cDNA cloning of cytokinin-specific binding protein〜" Europian Journal of Biochemistry. 258・2. 794-802 (1998)

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      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Toshiyuki Shirai 他12名: "Specific detection of phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate〜" Biochimia Biophysica Acta. 1402・3. 292-302 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Aya Tanatani 他7名: "Novel DNA minor groove binders with an aromatic layered〜" Nucleic Acids Symposium Series. 39. 31-32 (1998)

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      1998 Annual Research Report
  • [Publications] A.Azuma ら: "Photoaffinity labeling of tumor promoter-binding protein 〜" Biol.Pharm.Bull.20・1. 6-9 (1997)

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      1997 Annual Research Report
  • [Publications] T.Sasaki ら: "Photo affinity labeling of the ligand-interacting helix of the〜" Biol.Pharm.Bull.20・8. 913-916 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] H.Miyachi ら: "Tumor necrosis factor-alpha production-inhibiting activity of〜" Bioorg.Med.Chem.5・11. 2095-2102 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] T.Tashima ら: "Polyenylidene thiazolidine derivatives with retinoidal activities." Chem.Pharm.Bull.45・11. 1805-1813 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] K.Tanaka ら: "A target of phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate with a〜" Eur.J.Biochem.245・2. 512-519 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] T.Sasaki, Y.Hashimoto: "Photoaffinity labeling of RARs and mapping of labeled sites by〜" Methods in Mol.Biol.(印刷中). 298-305 (1998)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Toru Sasakiら: "Location of two photo affinity-labeled sites on the ligand-binding domain〜." Biological and Pharmaceutical Bulletin. 19・5. 659-664 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Yuichi Hashimotoら: "Photo affinity labeling of RAR and mapping the labeled sites with endoproteinase〜" Methods in Molecular Biology. (印刷中).

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] Akihiko Azumaら: "Photo affinity labeling of tumor promoter-binding protein (CN-TPBP) and 〜" Biological and Pharmaceutical Bulletin. 20・1. 6-9 (1997)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] 梅宮広樹: "レチノイデ アンタゴニスト" 薬学雑誌. 116・12. 928-941 (1996)

    • Related Report
      1996 Annual Research Report

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Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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