ニワトリBリンパ細胞株での、RAD遺伝子群の、DNA組換えと、修復機能の解析

Research Project

Project/Area Number	09269211
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	武田俊一京都大学, 医学研究科, 教授 (60188191)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	岩井裕子京都大学, 医学研究科, 助手 (10281726) 園田英一郎京都大学, 医学研究科, 助手 (50281093) 高田穣京都大学, 医学研究科, 助手 (30281728)
Project Period (FY)	1997
Project Status	Completed (Fiscal Year 1997)
Budget Amount *help	¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000) Fiscal Year 1997: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Keywords	DT40 / 相同組み換え / Rad51 / 組み換え修復
Research Abstract	ゲノムDNA上に2本鎖切断が起こり、それが修復されないと真核細胞は死亡する。真細胞は、組み換え修復(相同組み換え)とend joiningという2種類のDNA2本鎖切断修復経路を持つ。これらの生化学反応に関わるタンパク群は、その1次構造が酵母からヒトに至るまで非常によく保存されている。組み換え修復に関わる遺伝子群をRAD52エピスタシスグループと呼び、10種類以上の遺伝子が酵母とヒトでそれぞれ知られている。RAD51は、このエピスタシスグループの一員であり、酵母のRad51欠損株は、増殖可能であるが、ゲノム上に2本鎖切断を誘導する電離放射線照射に対して著しく感受性がある我々は、高等真核細胞(ニワトリBリンパ細胞株、DT40)からRad51コンデイショナルミュータント細胞を世界で初めて作成した(Sonoda et al,EMBO J.,Vol.17;598-608,1998)。このミユ-タントのRad51の発源を停止させると、少数のランダムな染色体断裂がM期で観察され、ほとんどの細胞は分裂後、死亡する。この結果は、高等真核細胞では増殖中に染色体断裂が起き、Rad51はその断裂を修復するのに必須の働きをしていることを示唆する。我々は、Rad51欠損細胞以外に以下の遺伝子の欠損細胞をDT40から作成した:Rad51B,Rad52,Rad54A,Rad54B(Hel),Mrell,Xrcc2,Ku70,poly-ADP ribose polymerese。これらの遺伝子のダブル/トリプルミユ-タント細胞を作っていく予定である。