tRNAの活性発現にかかわる機能構造の研究

Research Project

Project/Area Number	09278226
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Yamagata University
Principal Investigator	長谷川典巳山形大学, 理学部, 教授 (60095023)
Project Period (FY)	1997
Project Status	Completed (Fiscal Year 1997)
Budget Amount *help	¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000) Fiscal Year 1997: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000)
Keywords	tRNA / ミトコンドリア / 脳筋症 / 遺伝子異常 / ロイシン / クローニング / PCR / T7RNAポリメラーゼ
Research Abstract	脳筋症(MELAS)患者のミトコンドリア由来ロイシンtRNA(アンチコドンUUR)の構造と活性についての研究を行うにあたり、まず正常なヒトミトコンドリアロイシンtRNAとMELAS由来の変異体の構造遺伝子を含み、その上流にファージT7RNAポリメラーゼのプロモーターを有する遺伝子断片を合成した。各断片をライゲーション後、pUC19プラスミドにクローニングし、得られたクローンをDNAの配列決定により確認した。EcoRI/BamHIサイトを含む両末端に相補的なプライマーを用いて、PCR反応でこれらのプラスミドあるいはプラスミド断片を増幅された。これらのDNAを鋳型として、精製したファージT7RNAプリメラーゼによる試験管内転写反応で、正常および変異したロイシンTrnaを作成することができた。現在、大腸菌からのロイシル-tRNA合成酵素、およびウシ肝からミトコンドリアを単離し、ロイシル-tRNA合成酵素を含むアミノアシル-tRNA合成酵素標品の調製を行っており、近く活性の測定を行える見通しである。