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寄生虫・エキノコックスの糞便内抗原の解析とそれを利用した終宿主診断法の改良と応用

Research Project

Project/Area Number 09760282
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Applied veterinary science
Research InstitutionHokkaido University

Principal Investigator

野中 成晃  北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (50281853)

Project Period (FY) 1997 – 1998
Project Status Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywordsエキノコックス / 多包条虫 / 終宿主 / 診断 / 糞便内抗原 / モノクローナル抗体 / 人獣共通感染症 / 寄生虫
Research Abstract

本年度は、新しく多包条虫成虫排泄分泌(ES)抗原に対するマウスモノクローナル抗体(mAbs)を作製し、糞便内抗原検出法へ利用した。
mAbsは9種(Em a-Emi)得られ、Em a、hおよびiの3種はIgG1抗体、Em b-gの6種はIgM抗体であった。多種寄生虫抗原との反応性を調べた結果、3つのグループに分けられ(Em a,Em b-g,Em hとi)、Em hとiは多包条虫成虫および成虫ES抗原とのみ強く反応した。ウエスタンブロッティングはどのmAbsもES抗原とスメア状の反応を示し、多包条虫成虫切片の免疫染色ではmAbs(Em a,c,i)はいずれも成虫テグメントおよび虫体周囲の宿主腸管上皮と反応した。これらの反応が抗原の過ヨウ素酸処理によって喪失したことからmAbsの認識抗原が糖であることが示唆された。
そこでEm iおよびES抗原に対するポリクローナル抗体(rAb)を用いたサンドイッチELISA法により糞便内抗原の検出を試みたが、感度の低さが問題となった。感度向上のためにアビジン・ビオチン化酵素複合体法を用い、吸着抗体にrAb、一次抗体にEm i、二次抗体にビオチン化anti-mouse IgG(rAb/Em i/b-AntiM)および吸着抗体にEm i、一次抗体に現法で用いられているビオチン化EmA9を用いる検出系を選択した。
検出抗原は熱やホルマリンに対して安定であり、1%ホルマリン、熱処理を施して多包条虫卵を失活させたキツネ剖検材料を用いて各系を比較した。rAb/Em i/b-AntiM検出系と現法(rAb/b-EmA9)は同様の陽性検出率を示し、さらにEm iを用いた新しい検出系はいずれも現法で反応のみられる胞状条虫感染犬糞便とは反応せず、特異性に優れていた。いずれの検出系も単包条虫やフォーゲル包条虫感染動物の糞便内抗原の検出が可能で、他のエキノコックスの終宿主診断にも応用できることが示された。

Report

(2 results)
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All Other

All Publications (7 results)

  • [Publications] Nonaka,N.: "Monitoring of Echinococcus multilocularis infection in red foxes in Shiretoko,Japan,by coproantigen detection" Parasitology. 116・2. 193-200 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Sakai,H.: "Coproantigen detection in a routine fox survey of Echinococcus multilocularis in Hokkaido,Japan" Parasitology International. 47・1. 47-51 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Sakai,H.: "Coproantigen detection in a survey of Echinococcus multilocularis infection among red foxes,Vulpes vulpes schrencki,in Hokkaido,Japan" Journal of Veterinary Medical Science. 60・5. 639-641 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Morishima,Y.: "Coproantigen survey for Echinococcus multilocularis prevalence of red foxes in Hokkaido,Japan" Parasitology International. (in press). (1999)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Morishima,Y.: "Evaluation of coproantigen diagnosis for natural Echinococcus multilocularis infection in red foxes" Japanese Journal of Veterinary Research. 46・5. 185-189 (1999)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Malgor,R.: "Coproantigen detection in dogs experimentally and naturally infected with Echinococcus granulosus by a monoclonal antibody based enzyme linked immunosorbent assay" International Journal for Parasitology. 27・12. 1605-1612 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Nonaka,N.: "Monitoring of Echinococcus multilocularis infection in red foxes in Shiretoko,Japan,by coproantigen detection" Parasitology. 116(印刷中). (1998)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report

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Published: 1997-04-01   Modified: 2016-04-21  

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