神経分化、再生におけるRet蛋白の機能解析

• Project/Area Number: 09770143
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Experimental pathology
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 岩下 寿秀 名古屋大学, 医学部, 助手 (00283432)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000); Fiscal Year 1998: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 1997: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
• Keywords: RETプロトオンコジーン / GDNF / チロシンキナーゼ / 多発性内分泌腫瘍症 / ヒルシュスプルング病 / retプロトオンコジーン

Research Abstract

RETプロトオンコジーン(以下RET)はGDNF(グリア細胞株由来神経栄養因子)、NTN等のGDNFファミリーをリガンドとする受容体型チロシンキナーゼをコードし、甲状腺髄様癌、副腎褐色細胞腫を遺伝的に発症する多発性内分秘腫瘍症(MEN)2A型、2B型、家族性甲状腺髄様癌及び大腸腸管神経節が欠損したために生じるヒルシュスプルング病(以下HSCR病)の原因遺伝子であることが明らかになっている。本研究ではHSCR病型変異を有するRET蛋白の不活化する機序を生化学的に解析した。
RETにHSCR病に認められたn種類の変異(E762Q,S765P,S767,F893L,R897Q,K907E,E921K,R972G,P973L,M980T,P1039Q,L1061P)を導入し、神経系細胞SK-N-MCに発現を試みた。1漏類のうち9種類のHSCR病型変異に(S765P,S767P,F893L,R897Q,K907E,E921K,P973L,P1039Q,L1061P)ついては、Ret蛋白の良好な発現を得ることができず、コントロール(c-Rct)の十分の一程度であった。10種類のHSCR病型変異を有するRct蛋白は蛋白レベルで不安定である可能性が示唆された。3種類(E762Q,R972G,M980T)の変異を有するRet蛋白は良好な発現を得ることができ、それらの発現しているSK-N-MC細胞とc-Ret蛋白が発現しているSK-N-MC細胞の間でシグナル伝達機構のどこに違いがあるのかを検討している。

Research Products

• [Publications] Toshihide Iwashita: "Biological and biochemical properties of Ret with kinase domain mutations identified in multiple endocrine neoplasia type 2B and familial medullary thyroid carcinoma." Oncogene. in press.
• [Publications] Masahide Takahashi: "Co-segregation of MEN2A and Hirschsprungs disdase : the same mutation of RET with both gain and loss-of-function?" Hum.Mutation. in press.
• [Publications] Seiko Nakayama: "Implication of expression of GDNF/Ret signalling components in differentiation of bone marrow hematopoietic cells." Brit.J.Hematol.in press.
• [Publications] Hideki Murakami: "Rho-dependent and -independent tyrosine phosphorylation of focal adhesion kinase, paxillim and p130cas mediated by glial cell line derived-neurotrophic factor." Oncogene. in press.
• [Publications] Naoya Asai: "Mechanism of Ret activation by a mutation at aspartic acid 631 identified in sporadic pheochromocytoma." Biochem. Biophys.Res.Commun.255. 587-590 (1999)
• [Publications] Masami Asai: "Malignant transformation of melanocytic tumors developed in metallothionein/ret transgenic mice is associated with dysregulation of MMP-9 and TIPM-2 expression." Jpn-J-Cancer-Res.90. 86-92 (1999)
• [Publications] Chika Nozaki: "Calcium-dependent Ret activation by GDNF and neurturin." Oncogene. 16. 293-299 (1998)
• [Publications] Toshihide Iwashita: "Biological properties of Ret with cysteine mutations correlates with multiple endocrine neoplasia type 2A,familial medullary carcinoma,and Hirschsprungs disease phenotype." Cancer Res.57. 2870-2872 (1997)
• [Publications] Mikinao Ohiwa: "Characterization of Ret-Shc-Grb2 complex induced by GDNF,MEN2A and MEN2B mutations." Biochem.Biolphys.Res.Commun.237. 747-751 (1997)