炎症局所での好中球浸潤支配機構とサイトカインカスケードの解明

• Project/Area Number: 09770154
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Experimental pathology
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 松川 昭博 熊本大, 医学部, 助手 (90264283)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 1998: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000); Fiscal Year 1997: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: 炎症 / サイトカイン / ケモカイン / サイトカインカスケード

Research Abstract

ウサギ急性炎症モデルでのGROの発現動態およびその役割を調べるためには,その遺伝子組み換え体および抗体の作製が必要となる.そこで,LPS刺激ウサギ脾細胞のcDNAライブラリーからGRO cDNAをクローニングし,これを発現ベクター(pQE-30:QIAGEN社)に組み込み,試大腸菌(E.coli M15[pREP4])に導入,ウサギGROの発現を拭みた.次に,大腸菌抽出液からGROタンパクを単離精製し,これをマウスおよびヤギにアジュバントとともに免疫し,モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を作製した.得られた抗体はウサギGROは認識するものの,他のウサギサイトカイン(TNFα,IL-1β,lL-8,MCP-1,IL-1 receptor antagonist)は認識せず,したがって炎症局所のGROの産生動態を知るうえで有用なツールと考えられた.そこで,ウサギGROをウサギ膝関節内に投与し,その時誘導される炎症反応を観察しようと計画した.しかしながら,上記GROは不溶性(8M Ureaには可溶)であったため,これをin Vivoに投与できなかった.そのためBaculovirus Transfer Vectorを用いる方法(Invitrogen社)で再度遺伝子組み換え体の作製を行い,その培養上清および細胞中から可溶性のGROを得た.現在このタンパクを精製中であり,精製後はin Vivoに投与し,その時の炎症反応を観察するとともに,ウサギ炎症モデルでのGROの産生動態を解明しその炎症反応への関与を明らかにしていく予定である.

Research Products

• [Publications] Sumitaka Imamura: "Involvment of tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, interleukin-8, and interleukin-1 receptor antagonist in acute lung injury caused by Schwarzman reaction." Pathol.International. 47. 16-24 (1997)
• [Publications] Makoto Kimura: "Blocking of TNF-α and IL-1 inhibits leukocyte infiltration at early, but not at late stage of S.aureus-induced arthritis and concomitant cartilage destruction in rabbits." Clin.Immunol.Immunopath.82. 18-25 (1997)
• [Publications] Akihiro Matsukawa: "Analysis of the inflammatory cytokine network among TNFα, IL-β, IL-1 receptor antagonist and IL-8 in LPS-induced rabbit arthritis." Labo Invest.76. 629-638 (1997)
• [Publications] Akihiro Matsukawa: "Detection and characterization of IL-1 receptor antagonist in tissues from healthy rabbits : IL-1 receptor antagonist is probably involved in health." Cytokine. 9. 307-315 (1997)
• [Publications] Kazuhiko Miyamoto: "IL-8 is involved in homologous TNFα-, but not in IL-1β-induced neutrophil infiltration in rabbits." Inflamm.Res.46. 472-477 (1997)
• [Publications] 松川昭博: "尿酸塩による関節炎の病態" Mebio. 14. 56-62 (1997)
• [Publications] 松川昭博: "炎症と抗炎症戦略" 医薬ジャーナル社, 16 (1997)