| Project/Area Number |
09770218
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Immunology
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
大石 一人 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60273702)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1997 – 1998
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1998)
|
| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1998: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
|
|---|
| Keywords | GPIアンカー / トランスアミダーゼ / GAAI / GPI8 / 翻訳後修飾 / GAA1 |
|---|
| Research Abstract |
GPIアンカーを夕冫パク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは少なくともGAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であり、GAA1はGPIアンカー付加シグナルの認識に、GPI8はシステイン残基が活性に必須であり、GPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。
1、 GAA1とGPI8にそれぞれFLAGとGSTのタグをつけてCHO細胞に導入し、可溶化後抗FLAG抗体でGAA1を免疫沈降すると、GPI8が特異的に共沈してきたことから、2つの遺伝子産物は複合体を形成していることが明らかになった。
2、 ヒトと酵母GAA1との間でキメラ分子を作成し、様々なGPIアンカー付加シグナルを認識できるかどうかを調べたところ、ヒトGAA1のC末側を酵母GAA1のC末部分に入れ換えると、酵母型の基質特異性を示したことから、GAA1のC末側にGPIアンカー付加シグナルの認識部位があること、すなわちGAA1は付加シグナルを認識していることを明らかにした。
3、 GPI8はある種のシステインプロテアーゼと相同性を持つことから、このプロテアーゼファミリーに属する全てのメンバーにおいて保存され、活性に重要であると予想されるヒトGPI8の164番目のヒスチジンあるいは206番目のシステインをアラニンに変えた変異体を作成した。これらの変異体ではその活性は完全に消失したことから、GPI8はGPIアンカー付加シグナルの切断・除去に働いていることを明らかにした。
|
