赤血球系細胞のがん化に関わるetsファミリーPU.1/spi-1遺伝子の機能解析

• Project/Area Number: 09770837
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Hematology
• Research Institution: Sasaki Institute
• Principal Investigator: 米山 ひとみ (山元 ひとみ) 佐々木研究所, 細胞遺伝部, 研究員 (30290977)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000); Fiscal Year 1998: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000); Fiscal Year 1997: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: PU.1 / CBP

Research Abstract

etsファミリー転写因子PU.1とコアクチベーターCBPの相互作用
酵母を用いたTwo-hybrid法によりPU.1蛋白質と相互作用する蛋白質として単離されたCREB binding protein(CBP)との詳細な解析を行った。GST binding assayでin vitroでのPU.1とCBPの結合を確認し、種々の欠失変異体を用いてその結合部位も同定した。PU.1側の結合部位はN末側の転写活性化ドメイン(78-122a.a.)であり、CBP側の結合部位はZnフィンガーを含むC末側(1283-1915a.a.)であった。次に、PU.1の転写活性化能へのCBPの関与について機能解析を行った。ルシフェラーゼ遺伝子にPU.1結合部位を3回繰り返した配列を繋いだレポーター遺伝子をHeLa細胞に導入してreporter gene assayを行ったところ、PU.1による転写活性化はCBPにより協調的に働き、CBPの量依存性に増強された。一方、PU.1結合部位を欠いたCBPではPU.1と協調的に働くことはなかった。以上のことからCBPは転写因子PU.1と結合し、そのコアクチベーターとして機能することが明らかになった。今後、CBPを介した転写因子間の正または負のクロストークの詳細な解析を通じ、Etsファミリー転写因子が血液細胞の細胞増殖、分化、アポトーシスに及ぼす役割を明確にする。

Research Products

• [Publications] Kihara et al.: "Down-regulation of c-Myc and B cl-2 Gene Expression in PU.1-induced Apoptosis in Murine Erythroleukemia Cells" International Journal of Cancer. 76. 523-530 (1998)
• [Publications] Yamada et al.: "Reduction of DNA Binding Activity of the GATA-1 Transcription Factor in the Apoptoic process Induced by Overexpression of PU.1 in Murine Erythroleukemia Cells" Experimental Cell Research. 245. 186-194 (1998)
• [Publications] Yamamoto et al.: "Physical and functional interactions between the transcription factor PU.1 and the coactivator CBP" Oncogene. 18. 1495-1501 (1999)
• [Publications] Kihara et al.: "Down-regulation of c-Myc and Bcl-2 Gene Expression in PU.1-induced Apotosis in Murine Erythroleukemia Cells" International Journal of Cancer. (in press).