逆転写PCR(RT-PCR)法による、生体内における尿結上欠癌細胞検出法の開発

• Project/Area Number: 09771205
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Urology
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 藤井 靖久 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (70282754)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000); Fiscal Year 1998: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
• Keywords: bladder cancer / RT-PCR / cytokeratin 20 / Urothelial cancer / 尿路上皮癌 / 逆転写PCR(RT-PCR) / サイトクラテン20 / 診断

Research Abstract

膀胱癌株細胞を用いた実験的検討 ヒト膀胱癌株細胞3種からtotal RNAを抽出し,逆転写ポリメラーゼチェイン反応(RT-PCR)法にて,Cytokeratin(CK)20mRNAの発現をみた.PCRは,特異性,感受性を向上させるため,二組のプライマーにより,PCRを連続して2回行う方法(nested PCR)を行った.その結果,何れの膀胱癌細胞もCK20mRNAを発現していることがわかった.次に健常者20例の血液から,顆粒球細胞(末梢血中の癌細胞は顆粒球層に含まれるといわれているため)を分離し,RNAを抽出後,RT-PCR法にてCK20mRNAをみたところ,何れもCK20は発現していなかった.さらに本方法の感度をみるために,健常者の顆粒球10の7乗個に,膀胱癌株細胞を一定の割合(0,10,100,1000,1000,10000個)で混ぜた検体において,RT-PCR法を行ったところ,膀胱癌細胞10個という非常に少数での検出が可能であった.
臨床材料での検討 手術により採取した尿路上皮組織,尿路上皮癌組織からRNAを採取し,CK20mRNAの発現をみたところ,全ての例で陽性であった.次に尿路上皮癌患者から,末梢血を採取し,顆粒球層(癌細胞が含まれる)の細胞におけるCK20mRNAの発現をみた.CK20mRNAが陽性であったのは,表在性尿路上皮癌患者13例中0例,臨床的に転移のない浸潤癌患者21例中4例(19%),転移のある患者では6例中5例(83%)であった.
以上より,本方法により,末梢血中の膀胱癌細胞の存在を高い感受性,特異性で検出できるようになったと思われる.表在性癌患者の末血中には癌細胞はみとめられないものの,浸潤癌患者においては臨床的な転移のない場合も血中に癌細胞が存在している例があり,転移を有する例では高率に存在していることが示された.