| Project/Area Number |
09772006
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Biological pharmacy
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| Research Institution | Hokuriku University |
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Principal Investigator |
木村 敏行 北陸大学, 薬学部, 助手 (20234370)
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| Project Period (FY) |
1997 – 1998
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1998)
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| Budget Amount *help |
¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Fiscal Year 1998: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
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| Keywords | ウリジン / ウリジン受容体 / 睡眠 / シナプス膜 / レセプター / ヌクレオシド / ベンゾジアゼピン / 催眠作用 / 中枢抑制作用 / ピリミジンヌクレオシド / 精製 / バイオイメージングアナライザー |
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| Research Abstract |
我々はN3-フェナシルウリジンの催眠作用がペンゾジアゼビン、GABA、5-HTをはじめとする中枢系受容体に一部起因しているものの、我々が提唱する新規ウリジン受容体が真の作用部位であることを示唆している。そこで本研究はピリミジン系睡眠薬の作用機構解析を目的として、ウリジン受容体結合実験並びに精製を行い以下の新知見を得た。
リジン受容体結合実験 SD系雄性ラット脳を摘出後凍結、ミクロトームにて20μmの切片を作成し、[^3H]N^3-フェナシルウリジンをリガンドとしてジピリダモール100μM存在下4℃にて反応させ結合実験を行った。反応後、切片を緩衝液にて3回洗浄して乾燥、イメージングブレートに2〜4週間露光しバイオイメージングアナライザー(FUJIBAS-5000)によりその放射能分布を解析した。ラット脳切片上に[^3H]N^3-フェナシルウリジンは濃度依存的にに結合することが明らかとなり、大脳皮質、海馬、黒質、視床において結合部位の存在が確認された.この反応系にN^3-フェナシルウリジンの活性代謝物(S)-(+)-α-ヒドロキシ-β-フェネチルウリジンを添加した場合、特異的結合量は減少した。一方、催眠活性のない異性体である(R)-(-)体のウリジン受容体結合阻害作用は弱いものであり、催眠作用と受容体結合活性の間に相関性が認められた。
リジン受容体蛋白質の精製 ウシ視床より常法に従いシナプス膜を調製、1%3-[3(cholamidopropyl).dimethylammonio]-1-propane-sulfonate(CHAPS)で可溶化した.ウシ脳シナプス膜画分可溶化上清はSepharose 4Bカラムで溶出、続いて液体等電点電気泳動法により分子量29000のほぼ単一なタンパク質にまで分離・精製することができた.本精製タンパク質はウリジン特異的結合量を指標とするとシナプス膜画分に比較して31倍にまで精製された.以上の結果より、ピリミジンヌクレオシド銹導体の結合部位が催眠作用において受容体として機能、存在することがより明確になった.
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