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タンパク質のミトコンドリア標的化に必要なHsc70/HSDJシャペロン系の解析

Research Project

Project/Area Number 09780658
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Cell biology
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

寺田 和豊  熊本大学, 医学研究科, 講師 (00253724)

Project Period (FY) 1997 – 1998
Project Status Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywordsミトコンドリア / 分子シャペロン / hsc70 / DnaJ / オルニチントランスカルパミラーゼ / ルシフェラーゼ / オルニチントランスカルバミラーゼ
Research Abstract

サイトソルの分子シャペロンであるhsc70は、パートナーシャペロンとしてDnsJホモログを必要とする。哺乳類のサイトソルにはdj2(HSDJ/hdj-2)、dj1(hsp40/hdj-1)、dj3(DNJ3/CPR3)が存在する。一方、真核生物のサイトソルにGrpEホモログは存在しないものと考えられてきたが、最近hsc70に直接結合する因子として同定されたRAP46/BAG1-MはATP/ADP交換活性をもつと提唱されている。昨年度、代表者はdj2の生化学的な特徴を調べるとともに、タンパク質のミトコンドリア輸送と変性させたホタル・ルシフェラーゼの巻き戻しにdj1とdj2のどちらのDnaJホモログが必要なのか検討した。その結果hsc70-dj2シャペロン系がタンパク質の巻き戻しとミトコンドリアへのタンパク質輸送を中心的に担うシャペロン系であることを明らかにした(Teradaetal.JCB1997)。今年度は、以下の実験を行った。
1. hsc70-dj1系あるいはhsc70-dj2系によるATPase活性の測定を行い、いずれのDnaJホモログによってもhsc70のATPase活性の増大がみられることを確認した。
2. dj1、dj2のHeLa細胞内における分布を間接蛍光抗体法によって調べた。前者は核を中心に存在し、後者はサイトソルを中心に存在していた。また、熱ストレスによって細胞内分布が変わるか調べた。
3. 抗体レジンを用いたdepletion-readdition系をdj3やRAP46についても確立するために、それぞれのヒトcDNAをRT-PCR法によって調製し、大腸菌あるいは昆虫細胞を用いて組換えタンパク質の発現精製を行った。現在抗体を作成中である。
4. Northem法により、dj1,dj2,dJ3,RAP46の発現に臓器特異性があるか調べた。

Report

(2 results)
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All Other

All Publications (8 results)

  • [Publications] Mori,M.: "Mitochondrial protein import in animals." Biochem.Biophys.Acta. 1403(1). 12-27 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Yano,M.: "Functional analysis of human mitochondrial receptor Tom20 for protein import into mitochondria by overexpression of deletion mutants in mammalian cells." J.Biol.Chem.273(41). 26844-26851 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Namchai,C.: "Characterization of the novel mitochondrial protein import component,Tom34 in mammalian cells." J.Biochem.印刷中.

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Terada,K.,et al.: "The human DnaJ homologue dj2 facilitates mitochondrial protein import and luclferase refolding." The Journal of Cell Biology. 139(5). 1089-1095 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Kanazawa,M.et al.: "HSDJ, a human homolog of DnaJ, is involved in protein import into mitochondria." The Journal of Biochemistry. 121(5). 890-895 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Terada,K.,et al.: "Participation of the import receptor Tom20 in protein inport into mammalian mitochondria : Analyses in vitro and in cultured cells." FEBS Letters. 403(3). 309-312 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Yano, M.et al.: "Visualization of mitochondrial protein import in cultured mammalian cells with green fluorescent protein and effects of overexpression of the human import receptor Tom20." The Journal of Biological Chedmistry. 272(13). 8459-8465 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] 寺田和豊: "ミトコンドリアへのタンパク質輸送" 細胞. 29(13). 487-490 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report

URL: 

Published: 1997-04-01   Modified: 2016-04-21  

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