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小脳の形態形成に関わるフォスファターゼ阻害因子の研究

Research Project

Project/Area Number 09780725
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Neurochemistry/Neuropharmacology
Research InstitutionTokyo Metropolitan University

Principal Investigator

田岡 万悟  東京都立大学, 理学研究科, 助手 (60271160)

Project Period (FY) 1997 – 1998
Project Status Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1998: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywordscerebellum / developmene / protein / LANP / development
Research Abstract

本年度は科研費交付申請書に記したとおり、(1)II・III型LANPのクローニングと一次構造決定、(2)プロテインフォスファターゼ阻害の活性測定系の確立、(3)サブタイプの小脳における発現時期や局在の解析(4)プロテインフォスファターゼとの結合活性の解析を行った。
(1)についてはRT-PCRを中心に解析を行っていたが、計画を変更し、in silico cloning的な手法を取り入れて解析を行った。cDNAは、IMAGE consortiumより入手し、それらのcDNAがLANP II・III型のcDNAであることを制限酵素地図から確認した。LANP II・IIIはそれぞれ、272、260アミノ酸からなり、ロイシンリッチリピート構造の5回の繰り返しと酸性アミノ酸クラスター構造、核移行シグナルを持っていることを確認した。(2)については、リン酸化された基質をフォスファターゼで脱リン酸化し、その際に、発現させたLANPファミリーに属するタンパク質を反応液に加え、反応を解析した。GST-LANP IにはHong-Guoらの報告に比べ30分の1程度の活性があることを確認している。他のサブタイプについては実験が進行中である。(3)についてはプローブとなるLANP II・III型のcDNAの精製が進行中であり、結果は3月中に得られるものと思われる。(4)については、GST-LANP Iの融合タンパク質を精製し、組織抽出液と混合して、グルタチオン樹脂に結合、沈降させ、SDS-PAGE後に免疫化学的な解析を行った。抗フォスファターゼ抗体による陽性のシグナルは得られず、直接的な結合は確認できなかった。LANP II・皿についても実験が進行している。

Report

(2 results)
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • Research Products

    (1 results)

All Other

All Publications (1 results)

  • [Publications] 田岡万悟ら: "Leucine-rich Acidic Nuclear Proteinとトリプレットリピート病" 脳の科学. 20. 1123-1128 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report

URL: 

Published: 1997-04-01   Modified: 2016-04-21  

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