| Project/Area Number |
09835023
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
老化(加齢)
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology |
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Principal Investigator |
小河原 緑 財団法人 東京都老人総合研究所, 分子遺伝学, 助手 (60100111)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白澤 卓二 財団法人 東京都老人総合研究所, 分子遺伝学, 室長 (80226323)
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| Project Period (FY) |
1997 – 1998
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1998)
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| Budget Amount *help |
¥3,500,000 (Direct Cost: ¥3,500,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 1997: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | プレセニリン / アルツハイマー病 / モデルマウス / アイソフォーム / ES細胞 / 点突然変異 / 相同組換え / ターゲットコンストラクト |
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| Research Abstract |
1. プレセニリン1肝臓型アインフォームの発見
プレセニリン1遺伝子の発現をヒト脳、血液、肝臓等の臓器で検討し、肝臓、血液細胞内にこれまで報告されていないプレセニリン1転写産物のアイソフォームが存在することを発見した。このアイソフォームの全一次構造を決定し、プレセニリン1-374(アミノ酸が374残基より構成される)と命名した。,ゲノム遺伝子の解析によって、プレセニリン1-374が既に報告されている脳型アイソフォーム(プレセニリン1-467)と同一の遺伝子からデフィッファレンシャル・スプライシングにより合成されることを明らかにした。
2. プレセニリン1タンパク質の解析
プレセニリン1タンパク質の特性を明らかにするため、プレセニリン1-467アイソフォームをinvitroで合成し、ドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミド電気泳動(SDS-PAGE)上での挙動を検討した。プレセニリン1タンパク質は、加熱処理により凝集塊を形成した。
3. プレセニリン1変異マウスの作製
マウスゲノムのエクソン9部分にヒト型プレセニリン1-374アイツフォームC末端部分をコードするcDNA断片を挿入し、強制的に374型にスプライスするミニジーンコンストラクトを作製した。このコンストラクトをES細胞に導入し、4個の相同組み換えES細胞クローンを得た。これらのES細胞クローンを用いてキメラマウスを作製し、ミニジーンコンストラクトがジャームラインに移行したヘテロマウスを得た。さらに、ヘテロマウスの交配を行ったところ、ホモマウスは死産もしくは生後直後死亡した。
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