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高効率物質生産システムとしての浮遊-付着可変型動物細胞培養系の開発

Research Project

Project/Area Number 09876023
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 応用微生物学・応用生物化学
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

人見 清隆  名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教授 (00202276)

Project Period (FY) 1997 – 1999
Project Status Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1999: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 1998: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 1997: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Keywords筋芽細胞 / カルパスタチン / カルパイン / 付着性細胞
Research Abstract

本年度は最終年度であり、以下の通り研究を総括する。動物細胞を用いた物質生産、機能解析を行う上で、付着細胞を何らかの制御機構の下で浮遊化して培養することができれば、非常に多彩な実験系が成立する。本研究はそのような細胞培養系の確立を最終目的として、細胞接着タンパクの切断や付着性に関与する細胞内プロテアーゼ、カルパインの発現制御を行ってそのような細胞株が作成できるか検討したものである。すなわち、カルパインとその特異的阻害タンパク質カルパスタチンについて、一方を誘導的に発現させるなど、本来厳密にレベルが制御される両タンパクの割合を変えて、接着関連タンパクの急激な変化、ひいてはその付着性の変化を検討しようとした。細胞としては、筋芽細胞C2C12、および線維芽細胞NIH3T3,L929を用いた。本研究では初年度にまず、カルパイン、カルパスタチンの安定発現株の取得を試み、カルパスタチンについてのみ成功した。カルパインについては、最終年度まで取得ができなかった。カルパスタチンについては、NIH3T3については付着性に変化が生じ、カルパイン活性の相対的な低下も見られた。逆にカルパスタチン発現量を抑制させて、カルパイン活性の相対的な上昇→付着性の現象を試みているが、抑制株の取得を現在行っている段階である。カルパスタチン、カルパインの安定、誘導発現株の取得は他の遺伝子群に比べて明らかに困難で、これは細胞に致死的効果があったためではないかと考えられる。

Report

(3 results)
  • 1999 Annual Research Report
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All Other

All Publications (9 results)

  • [Publications] K.Hitomi: "Purification and characterization of the active-site-mutated recombinant human mu-calpain in baculovirus-infected Insect cells"Biochemical Biophysical Research Communications. 246. 681-685 (1998)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] J.Takano: "Structure of mouse calpastatin isoforms:Implication of species-common and species-specific alternative splicing"Biochemical Biophysical Research Communications. 260. 339-345 (1999)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] K.Hitomi: "Constant Expression of Mouse calpastatin isoforms during differentiation in myoblast cell line,C2C12"Cytotechnology. (印刷中). (2000)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Hitomi et al.: "Putification and characterization of the active-site-mutated recombinant human nu-calpain in bacnlovirus-infected insect cells" Biochemical and Biophysical Research Communications. 246. 681-685 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Maki et al.: "Calcium-induced exposure of hydrophobic surface on mouse ALG-2 which is a member of the penta-EF-hand protein family" The Journal of Biochemistry (Tokyo). 124. 1170-1177 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Takahashi et al.: "Regulation of matrix metalloproteinase-9 and inhibition of tumor invasior by the membrane-anchoed gycoprotein RECK" Proceedings of the National Academy of Science.USA.95. 13221-13226 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Edy M.Vilei, et.al.: "Functional properties of recombinant calpain I and of mutants lacking domains and of the cafalytic subunit" Journal of Biological Chemistry. 272,(41). 25802-25906 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] M.Maki et al.: "A growing family of the calcium-binding proteins with five EF-hand motifs" Biochemical Journal. 328. 718-720 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] K.Hitomi et.al: "Expressior of biologically active human calpastatin in baculovirus-infected insect cells and in Ecsherichiacoli" Biochem cal.Bioscience.Biotechnology. 62. 136-141 (1998)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report

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Published: 1997-04-01   Modified: 2016-04-21  

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