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細胞膜ミクロドメインの探索

Research Project

Project/Area Number 09877002
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General anatomy (including Histology/Embryology)
Research InstitutionGunma University

Principal Investigator

高田 邦昭 (高田 邦明)  群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (20129290)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 鈴木 雅一  群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (60280913)
鈴木 健史  群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (00261868)
Project Period (FY) 1997 – 1998
Project Status Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
KeywordsMDCK細胞 / 糖輸送体 / GLUT1 / GLUT5 / SGLT1 / トランスウエル / タイトジャンクション / 細胞膜 / ミクロドメイン / 水チャンネル / 蛍光抗体法 / 唾液腺 / 免疫電顕法
Research Abstract

MDCK細胞に糖輸送体GLUT1,GLUT5,SGLT1の遺伝子を,リポフェクション法により導入した.これらを物質透過性のある膜のトランスウエル上で培養し上皮様の細胞層を得た.それぞれの糖輸送体に特異的な抗体を用いて蛍光抗体染色し,導入した遺伝子の発現と局在を検討した.
同時にタイトジャンクション蛋白のオクルディンを特異抗体で,核をDNA特異的なTO-PRO3で染色し,3チャネル共焦点レーザー顕微鏡で観察した.コンフルエントになった細胞シートでは,GLUT1は基本的にはMDCK細胞の基底側壁部細胞膜に局在した.一方GLUT5とSGLT1はMDCK細胞の頂部細胞膜に局在した.GLUT1,GLUT5,SGLT1の中のどれか二つを用いたコトランスフェクションと蛍光二重染色によっても同様の結果が得られた.GLUT1の発現を時間をおって観察した結果,GLUT1はまず細胞内から細胞膜へ輸送され全周にわたって分布した.やがてGLUT1は基底側壁部細胞膜に多くみられるようになり,最終的には基底側壁部細胞膜に限局して局在した.GLUT5も最初はGLUT1と同様に細胞膜全周にわたって存在したが,頂部細胞膜により多く局在するようになった.一方SGLT1は最初は主に細胞内部に存在し,やがて培養液に接する細胞の頂部に陽性となった.今回の条件ではSGLT1はGLUT5とは異なり,細胞膜全周への局在はほとんど見られなかった.現在,頂部微絨毛を一ヵ所に集める作用のあるジャスプラキンを用いて頂部細胞膜を微絨毛とその他のミクロドメインに分けた場合の分布を,高解像の共焦点レーザー顕微鏡と電顕を使い検討中である.

Report

(2 results)
  • 1998 Annual Research Report
  • 1997 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All Other

All Publications (12 results)

  • [Publications] Shin B-C: "Multiple isoforms of the regulatory subunit for phosphatidylinositol 3-kinase(PI3-kinase)are expressed in neurons in the rat brain." Biochem Biophys Res Commun. 246. 313-319 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Matsuzaki T: "Aquaporin-5(AQP5),a water channel protein,in the rat salivary and lacrimal gland:Immunolocalization and effect of secretory stimulation." Cell Tissue Res. in press.

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Tserentsoodol N: "Colocalization of tight junction proteins,occludin,ZO-1,and glucose transporter GLUT1 in cells of the blood-ocular barrier in the mouse eye." Histochem Cell Biol. 110. 543-551 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] 高田邦昭: "糖輸送体と上皮細胞の極性." Mebio. 15(3). 129-131 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] 高田邦昭: "上皮細胞における糖輸送機構." 解剖学雑誌. 73. 485-495 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] 高田邦昭: "ラット胎盤の糖輸送機構." Mebio. 15(7). 95-97 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Inukal K: "Targeting of GLUT1-GLUT5 chimeric proteins in the polarized cell line Caco-2." Mol Endocrlnol. 11. 442-449 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Suzuki M: "Locallzation of the ATP-sensitive K+channel subunit Kir6.2 in mouse pancreas." Diabetes. 46. 1440-1444 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Shn B-C: "Glucose transporter Glut3 in the rat placental barrier : A possible machinery for the transplacental transfer of glucose." Endocrinology. 138. 3997-4004 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Matsuzakl T: "Nuclear staining for laser confocal microscopy." Acta Histochem Cytochem. 30. 309-314 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Suzuki M: "Kir6.1 : a possible subunit of ATP-sensitive K+channels in mitochondria." Biochem Biophys Res Commun. 241. 693-697 (1997)

    • Related Report
      1997 Annual Research Report
  • [Publications] Takata K: "GLUT1 glucose transporter in the lactating mammary gland in the rat." Acta-Histochem Cytochem. (in press).

    • Related Report
      1997 Annual Research Report

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Published: 1997-04-01   Modified: 2016-04-21  

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