ヒト口腔扁平上皮癌細胞の放射線耐性遺伝子および薬剤耐性遺伝子の研究

• Project/Area Number: 09877391
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Surgical dentistry
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 森藤 政代 九州大学, 歯学部, 助手 (90271113)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大石 正道 九州大学, 歯学部, 教授 (70037505)
• Project Period (FY): 1997 – 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000); Fiscal Year 1998: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000); Fiscal Year 1997: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
• Keywords: 口腔癌 / 遺伝子 / ゲノム / 放射線耐性 / 薬剤耐性 / ヒト / Genomic Figer Print法 / Differential Display法 / 扁平上皮癌 / 遺伝子導入

Research Abstract

当科患者の放射線および抗癌剤(ブレオマイシン)治療前後の検体の遺伝子を比較検討し,放射線耐性遺伝子あるいは抗癌剤耐性遺伝子の解析を行った。また患者の未治療の検体から癌細胞株を作製し,それらに対し,抗癌剤(ブレオマイシン,シスプラチン)耐性癌細胞株を樹立した。
1.放射線およびブレオマイシン治療前後の検体から,DNAを抽出し,Aluのプライマー(岡山大学病態遺伝学の清水憲二教授より譲与)の組み合わせ(10組)にて,Inter-AlulongPCR法によるGenomicFigerPrint法(ヒトゲノムDNA中に存在するAlu配列を利用したPCR法)を行った。治療前後にて相違のあるバンドのうち,5検体に共通なバンドを3種類認め,耐性遺伝子の可能性が考えられた。これらに対し,ダイレクトシークエンスを行ったが,エラーが多いため,クローニングを行い,同定を行っている。また,摘出物の量的問題により,TotalRNAが抽出できた検体が2種類に限定され,これらに対し,240種類のプライマーを用い,DifferentialDisplay法を行った。発現の相違のあるバンドを6種類認め,その中でノーザンブロット法にて確認できたものが,2種類あったので,クローニングを行っている。
2.当科患者の未治療の検体から,粘表皮癌細胞株MQ-SH,頬粘膜癌細胞株SQ-UTを樹立し,ブレオマイシンまたはシスプラチン0.1μg/mlを培地に添加し,1μg/mlまで徐々に濃度を上げ,耐性癌細胞株を6か月かけて樹立したところである。これらの耐性・非耐性癌細胞株に対し,GenomicFigerPrint法やDifferentialDisplay法を進めている。また口蓋(原発巣,リンパ節転移巣),舌(2種類),舌癌リンパ節転移巣(2種類),舌癌皮膚転移巣由来の癌細胞株を樹立したので,各々に対し,同様に耐性癌細胞株を作製しているところである。放射線耐性癌細胞株は今回樹立できなかった。